維生素是動(dòng)物所需的五大營養(yǎng)素之一,，其中維生素A是視紫紅質(zhì)（感光色素）的重要組成部分,，具有維持正常的視覺,，促進(jìn)生長發(fā)育,，維持上皮結(jié)構(gòu)完整健全和增強(qiáng)動(dòng)物免疫力等作用,。為滿足動(dòng)物生長需求,，常在動(dòng)物飼料中添加,。

現(xiàn)行有效的飼料中維生素A測定的國家標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 17817-2010 飼料中維生素 A 檢測皂化，其前處理方法包括皂化提取法和直接提取法,。皂化提取法適用于配合飼料,、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料和維生素預(yù)混合飼料中維生素A的測定,。直接提取法僅適用于維生素A含量較高的維生素預(yù)混合飼料中維生素A的測定,。目前皂化提取過程實(shí)驗(yàn)室多自行搭建水浴回流裝置，操作繁瑣，占用人工,。本試驗(yàn)對自行搭建水浴回流裝置與一套集成加熱,、磁力攪拌、自動(dòng)升降,、定時(shí)啟停,、冷熱水雙浴的陣列水浴回流儀進(jìn)行比較，試驗(yàn)證明集成一體的陣列水浴回流儀有效優(yōu)化了皂化前處理過程,達(dá)到了簡化實(shí)驗(yàn)過程,，減少人工操作,，提升實(shí)驗(yàn)效率的目的。

1. 材料與方法

1.1 儀器

NAI-HL10S智能水浴冷凝回流提取儀

《中國藥典》浸出物的測定法中醇溶性熱浸法 脂肪與脂肪油測定法中藥浸提回流法

GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中淀粉總酸維生素A,、D,、E脂肪酸的測定

GB 31604.5-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品接觸材料及制品 樹脂中提取物的測定

GB/T 5009.127-2003 食品包裝用聚酯樹脂及其成型品中鍺的測定

GB/T 8021-2003 石油產(chǎn)品皂化值測定法

GB/T 17817-2010 飼料中維生素 A 檢測皂化

GB/T 10345-2022 白酒分析方法（總酯和酸酯總量的測定）

土壤分析技術(shù)規(guī)范 甲亞胺-H比色法 土壤中硼的測定（提硼回流裝置-石英冷凝回流提取儀）

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品、試劑

維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品,，含量≥99%,。

無水，分析純,，經(jīng)檢驗(yàn)無過氧化物,；無水乙醇，分析純,；甲醇,，色譜純；2,6二叔丁基對甲酚（BHT）,，分析純,；無水硫酸鈉，分析純,；氮?dú)猓兌?/span>99.9%）,；碘化鉀溶液100g/L；淀粉指示劑5g/L,；硫代硫酸鈉溶液50g/L;氫氧化鉀溶液500g/L,；L-抗壞血酸溶液5g/L；酚酞指示劑10g/L,。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品34.3mg（精確至0.0001g）于皂化瓶中,，按前處理方法進(jìn)行皂化和提取，將提取液全部濃縮蒸發(fā)至干,，用正己烷溶解殘?jiān)萌?/span>100mL棕色容量瓶中并稀釋至刻度,，混勻，4℃保存,。

維生素A標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取1.00mL維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于100mL棕色容量瓶中,，用氮?dú)獯蹈桑眉状枷♂屩量潭龋靹颉?/span>

1.4 前處理方法

稱取配合飼料10g于250mL圓底燒瓶中,，加入50mL L-抗壞血酸溶液,，使試樣分散、浸濕,，加10mL氫氧化鉀溶液,，混勻。置于沸水浴上回流30min,，不時(shí)振蕩防止試樣粘附在瓶壁上,，皂化結(jié)束，分別用5mL無水乙醇,、5mL水自冷凝管頂端沖洗其內(nèi)部,，取出燒瓶至冷水浴中冷卻至40℃。

定量轉(zhuǎn)移全部皂化液于盛有100mL無水的500mL分液漏斗中,，用50mL水分3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗,，加蓋、放氣,、隨后混合,，激烈振蕩2min，靜置,、分層。轉(zhuǎn)移水相于第二個(gè)分液漏斗中,，分別用100mL,、60mL重復(fù)提取兩次，棄去水相,，合并三次相,。用水每次100mL洗滌提取液至中性。提取液通過無水硫酸鈉脫水,，轉(zhuǎn)移至250mL棕色容量瓶中,，加100mg BHT使之溶解，用定容,。

從提取液中分取適當(dāng)體積旋轉(zhuǎn)蒸干,，殘?jiān)眉状既芙夂筮^0.45um膜過濾，進(jìn)樣測試,。

1.5 儀器條件

色譜柱：C18型柱,；

流動(dòng)相：甲醇+水（95:5）；

流速：1.0mL/min,；

柱溫：室溫,；

進(jìn)樣量：20ul；

檢測波長：326nm。

2. 結(jié)果與討論

2.1 皂化前處理裝置對比

皂化前處理是維生素A測試關(guān)鍵前處理過程,，傳統(tǒng)人工搭建水浴回流裝置,，操作繁瑣，占用人工,。皂化前處理過程中,，需要不時(shí)振蕩以防止試樣粘附在瓶壁上，實(shí)驗(yàn)人員需要多次拆卸圓底燒瓶,，振蕩后再安裝進(jìn)行水浴回流,，需要實(shí)驗(yàn)人員一直值守。陣列水浴回流儀可以同時(shí)處理6個(gè)樣品,，通過搭載間歇磁力攪拌,，免去了人工振蕩過程，加上定時(shí)啟停,、自動(dòng)升降功能,，實(shí)現(xiàn)無需人員值守。實(shí)驗(yàn)比較了傳統(tǒng)人工搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀皂化前處理過程,，證明陣列水浴回流儀能夠有效優(yōu)化簡化實(shí)驗(yàn)過程,、減少人工操作、提升皂化前處理效率,。

表1 智能水浴冷凝回流提取儀參數(shù)設(shè)置

2.2 樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

稱取10g空白復(fù)合預(yù)混飼料樣品12份,，添加10mg維生素A乙酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，分別使用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀進(jìn)行皂化前處理,，經(jīng)提取,、濃縮后上機(jī)測試，計(jì)算兩種裝置回收率,。自行搭建水浴回流裝置回收率在94.1%~97.8%之間,，陣列水浴回流儀回收率在97.3%~99.8%之間，陣列水浴回流儀回收率略優(yōu)于自行搭建水浴回流裝置,，測試結(jié)果見表2,。

表2 不同皂化裝置回收率

2.3 方法重復(fù)性

分別使用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀對同一飼料樣品進(jìn)行前處理，兩種裝置分別進(jìn)行6次平行測定,。自行搭建水浴回流裝置6平行測試相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.75%,，陣列水浴回流儀為1.74%，使用陣列水浴回流儀進(jìn)行皂化前處理重復(fù)性優(yōu)于自行搭建水浴回流裝置,，結(jié)果見表3,。

表3 不同皂化裝置重復(fù)性

3. 結(jié)論

試驗(yàn)分別采用自行搭建水浴回流裝置和陣列水浴回流儀對飼料中維生素含量進(jìn)行測定，從整個(gè)測定過程來看,，陣列水浴回流儀通過集成皂化前處理操作,，尤其是間歇攪拌功能,、自動(dòng)升降功能，大大簡化了實(shí)驗(yàn)過程,，減少了人工操作,。同時(shí)，多樣品自動(dòng)同時(shí)處理,，在樣品的準(zhǔn)確度和重復(fù)性上要優(yōu)于人工搭建水浴回流裝置,，陣列水浴回流儀可以很好應(yīng)用于飼料中維生素A的測定。