一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | PC3-LUC-BSD(人前列腺癌細胞-熒光素酶標記(STR鑒定正確)) | |||
細胞別稱 | PC3-LUC-BSD,;人前列腺癌細胞-熒光素酶標記,;PC3-熒光素酶標記 | |||
種屬來源 | 人 | |||
組織來源 | 前列腺 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | |||
背景介紹 | Luciferase PC-3細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩(wěn)定,,培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持,??捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照,,也可用于活體動物成像實驗。 PC3-LUC-BSD細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因,。 PC-3細胞源于一位62歲白人男性Ⅳ級前列腺腺癌患者的骨頭轉移灶,;PC-3細胞的酸性磷酸酶活性和5-α-睪丸激素還原酶活性都低。 | |||
藥篩濃度 | PC3-LUC細胞bsd(Blasticidin)藥篩濃度為4.0ug/ml,,培養(yǎng)過程中可不用再添加bsd,,細胞復蘇和傳代過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基,。如若擔心抗性隨著傳代時間降低,,需在細胞貼壁,形態(tài)展開,,生長穩(wěn)定后,,定期用2.0ug/ml濃度bsd維持。 | |||
Luc成像文獻 | ![]() PC-3-LUC活體成像參考文獻1 PC-3-LUC活體成像參考文獻2 | |||
STR鑒定位點圖 | ||||
生物安全等級 | 1 | |||
細胞規(guī)格 | 1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
支原體檢測 | 無 | |||
保藏機構 | ATCC; CRL-1435 ATCC; CRL-7934 DSMZ; ACC-465 ECACC; 90112714 | |||
培養(yǎng)基 | 90% F12K+10% FBS+PS | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳,;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,,液氮儲存 | |||
細胞貨期 | 現(xiàn)貨,1周左右 | |||
運輸方式 | 復蘇發(fā)貨(T25瓶免運輸費用)/凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 | |||
供應限制 | 于科學研究,,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,,75%酒精消毒瓶壁,,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗PC3-luc-BSD細胞1-2次,。 b,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有PC3-luc-BSD細胞,,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細胞情況而定),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,,1000 rpm離心5 min,,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 c,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 將含有1 mL PC3-LUC-BSD細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,,棄去上清液,,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有PC3-LUC-BSD細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,,加入約4 mL培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度,。 | ||
注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題,,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,,是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,,若未融化可以將細胞按正常步驟保存,; 2.為保證細胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,,請立即解凍復蘇細胞,。 | ||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā),細胞是否解凍,,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子等,,確保細胞培養(yǎng)條件一致,,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔,。 | |||
備注:客戶在細胞培養(yǎng)過程中,,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答,。 | ||||
三,、細胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,,棄盡PBS,,加 1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數(shù),。 b,、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,,輕輕混勻,,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識,。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,,及時調整實驗方案 | |||
四,、售后服務 | ||||
重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā),; 2.收到細胞未開封,,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā),; 3.收到細胞3天內(nèi),,發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,,重發(fā),; 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,,絕大多數(shù)細胞未存活,,經(jīng)核實后,重發(fā),; 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,,重發(fā),; 6.細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,,經(jīng)核實后,,重發(fā); 7.視具體情況而定,。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,,不重發(fā); 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,,不重發(fā),; 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā),; 4.細胞狀態(tài)不好,,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā),; 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,,不重發(fā); 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,,不重發(fā),; 7.視具體情況而定。 |