| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | Calu-1-LUC-EGFP（人肺癌細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記）(STR鑒定正確) | |||
| 細胞別稱 | Calu-1-LUC-EGFP,；人肺癌細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記,；Calu-1-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；47歲 | |||
| 組織來源 | 器官：肺,；腫瘤分期：Ⅲ期,； 疾病：表皮瘤,；取材轉移灶：肋膜 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | |||
| puro藥篩濃度 | Calu-1-LUC-EGFP細胞puro藥篩濃度為1.0 ug/ml,，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5 ug/ml濃度puro維持 | |||
| Luciferase活性檢測 |  Calu-1-LUC-EGFP LuciferaseLuciferase檢測報告下載 | |||
| 細胞代數(shù) | 10代以內 | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 培養(yǎng)基 | 89%McCoy's 5A+10% FBS+1%PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 細胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 于科學研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗Calu-1-LUC-EGFP細胞1-2次,。 b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞,，棄去消化液,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。 c,、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 d,、將Calu-1-LUC-EGFP細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 1.將含有1 mL Calu-1-LUC-EGFP細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。 3.將所有Calu-1-LUC-EGFP細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。 4.第二天換液并檢查細胞密度。 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化,，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存,； 2.為保證細胞的高存活率,，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞,。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后,，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā)，細胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)),；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,，責任由客戶自行承擔。 | |||
| 備注：客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2,，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三,、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a,、收集Calu-1-LUC-EGFP細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù),。 b,、根據(jù)Calu-1-LUC-EGFP細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×10 6~1×10 7/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識,。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常,，及時調整實驗方案 | |||
| 四,、售后服務 | ||||
| 重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等,，重發(fā)； 2.收到細胞未開封,，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細胞3天內,，發(fā)現(xiàn)污染問題,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數(shù)細胞未存活,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 6.細胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 4.細胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā),； 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā)； 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,，不重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 | |||
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