| 一,、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | MSC-EGFP-LUC（人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記） | |||
| 細胞別稱 | MSC-EGFP-LUC,；人臍帶間充質(zhì)干細胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標記；人臍帶間充質(zhì)干細胞-EGFP-LUC | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 臍帶 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 形態(tài)特征 | 梭形細胞樣 | |||
| puro藥篩濃度 | MSC細胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml,，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.2ug/ml濃度puro維持 | |||
| 質(zhì)量檢測 | 人臍帶間充質(zhì)干細胞純度高于 90%,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 1x106cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | |||
| 培養(yǎng)基 | 人臍帶間充質(zhì)干細胞專用培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ | |||
| 背景介紹 | 臍帶間充質(zhì)干細胞是一種能分化成骨細胞,、脂肪細胞和軟骨細胞的多能干細胞。其具有強大的增殖能力,，且參與構(gòu)成造血微環(huán)境,，因此被廣泛應(yīng)用于組織工程，細胞治療和基因治療,。 Luciferase MSC細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白,。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持,?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗,。 MSC細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因,。 | |||
| 流式鑒定結(jié)果 | ||||
| Luciferase活性檢測 |  MSC-EGFP-LUC Luciferase檢測報告下載 | |||
| 傳代方法 | 1:3至1:5,，每周2- 3次 | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵） | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 二,、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 無須平衡,，直接放入-80冰箱（不超過一周）或者液氮罐保存,，建議盡早復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題,，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察,，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率,，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后,，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā),，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照）,，記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子等,，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔,。 | |||
| 備注：客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答,。 | ||||
| 三,、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞,，進行細胞計數(shù),。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5x106~1x107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,，細胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā),； 3.收到細胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,，絕大多數(shù)細胞未存活,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,，不重發(fā),； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 4.細胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,，不重發(fā)； 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā),； 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 | |||
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