| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | SK-N-BE(2) 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | SK-N-BE2; SKNBE(2); SKNBE-2; SKNBE2; SK-N-BE; SKNBE ,；人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 2歲,，男 | |||
| 組織來源 | 腦，神經(jīng)母細(xì)胞瘤,，骨髓轉(zhuǎn)移灶 | |||
| 生長特性 | 半貼半懸 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)母細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞類型 | 腫瘤細(xì)胞 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 特別注意 | SK-N-BE(2)細(xì)胞形態(tài)多樣,，有的有長突觸、有的呈上皮細(xì)胞樣,；細(xì)胞會(huì)聚集,，形成團(tuán)塊并浮起。換液傳代時(shí)需要分別回收貼壁和懸浮細(xì)胞,，否則細(xì)胞會(huì)越來越少,。 | |||
| 背景介紹 | 1972年11月從一們多次及放療的擴(kuò)散性神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株。 該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性,。 有報(bào)道稱SK-N-BE(2)細(xì)胞的飽和濃度超過1x10^6細(xì)胞/平方厘米,。細(xì)胞形態(tài)多樣，有的有長突觸,，有的呈上皮細(xì)胞樣,。 細(xì)胞會(huì)聚集，形成團(tuán)塊并浮起,。 | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X,Y,；CSF1PO：10,10；D12S391：18,24,；D13S317：11,11,；D16S539：9,11；D18S51：16,16,；D19S433：12,13,；D21S11：30,32.2；D2S1338：17,23,；D3S1358：19,19,；D5S818：12,12；D6S1043：11,19,；D7S820：9,10,；D8S1179：13,14；FGA：22,25,；Penta E：14,18,；TH01：6,7,；TPOX：8,11；vWA：18,18,； | |||
| 生物安全等級(jí) | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 陰性 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2271 DSMZ; ACC-632 ECACC; 9501181 | |||
| 倍增時(shí)間 | ~36-48 hours | |||
| 致瘤性 | Yes, an inoculum of 1×10^7 cells produced tumors in cortisonized hamster cheek pouches with 18% frequency. | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%DMEM/F-12+10%FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置4-6h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清,，細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）。 b,、剩下貼壁的細(xì)胞,，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細(xì)胞1次,。 c,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min（視細(xì)胞情況而定）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，加少量培養(yǎng)基終止消化。 d,、按3mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 e、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中,。（次傳代建議一個(gè)滿的T25傳一個(gè)10cm或者2個(gè)T25）。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 | ||
| 注意事項(xiàng) | 懸浮細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)： 1、收貨時(shí)需鏡下拍照（看密度,、狀態(tài)） 2,、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%,，建議換液培養(yǎng),，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 3,、換液及傳代處理前,，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)（使細(xì)胞沉到瓶底）；收集上清,，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集,！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,，5min,。 4.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 5.因運(yùn)輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化,，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率,，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后,，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照）,，記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時(shí)給予解答,。 | ||||
| 三,、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常,，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
| 四,、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開封,，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā),； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,，不重發(fā),； 7.視具體情況而定。 | |||
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