| 一,、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | TF-1人紅系白血病細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | TF1; MFD-1,；TF-1,；人紅白血病細(xì)胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男,；35歲 | |||
| 組織來源 | 骨髓 | |||
| 生長特性 | 半貼半懸 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | TF-1細(xì)胞系1987年由Kitamura T等建立，源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本,，該患者具有嚴(yán)重的全血細(xì)胞減少癥,。細(xì)胞生長依賴于IL-3或GM-CSF，對IL-5無反應(yīng),。多種淋巴因子和細(xì)胞因子對該細(xì)胞都有作用,，如：IL-1、IL-4,、IL-6,、IL-9、IL-11,、IL-13,、CSF、LIF,、NGF,。該細(xì)胞不表達(dá)血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由該細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞化學(xué)特征及珠蛋白基因的組成性表達(dá),，顯示該細(xì)胞屬于紅系,。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導(dǎo)細(xì)胞合成血紅蛋白,，TPA刺激細(xì)胞向巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞分化,。 | |||
| STR位點 | Amelogenin：X，Y,；CSF1PO：12,，13；D13S317：8,，9,；D16S539：9，12；D18S51：13,；D19S433：14,，16；D21S11：30,；D2S1338：19,；D3S1358：15；D5S818：13,；D7S820：12,；D8S1179：11，15,；FGA：18,，19；TH01：7,，9,；TPOX：8；vWA：15,，17,； | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-2003 DSMZ; ACC-334 ECACC; | |||
| 培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10%FBS+2ng/ml rhGM-CSF+1%PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~36-72 hours | |||
| 染色體 | 78~104 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清,，細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）。 b,、剩下貼壁的細(xì)胞,，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細(xì)胞1次,。 c,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min（視細(xì)胞情況而定）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，加少量培養(yǎng)基終止消化,。 d、按3mL/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 e、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中,。（次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25）。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 | ||
| 注意事項 | 懸浮細(xì)胞收貨注意事項： 1,、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態(tài)） 2,、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下,，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng),，隔天觀察密度 c.如密度90%,，建議傳代 3、換液及傳代處理前,，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細(xì)胞沉到瓶底）,；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集,！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集,！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,，5min,。 4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 5.因運輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 | ||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時給予解答,。 | ||||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細(xì)胞,，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
| 注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā),； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā),； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā),； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,，不重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
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