一,、細(xì)胞基本屬性 | ||||
細(xì)胞名稱 | TF-1人紅系白血病細(xì)胞(STR鑒定正確) | |||
細(xì)胞別稱 | TF1; MFD-1,;TF-1,;人紅白血病細(xì)胞 | |||
種屬來源 | 人 | |||
年齡性別 | 男,;35歲 | |||
組織來源 | 骨髓 | |||
生長特性 | 半貼半懸 | |||
細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
背景介紹 | TF-1細(xì)胞系1987年由Kitamura T等建立,源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本,,該患者具有嚴(yán)重的全血細(xì)胞減少癥,。細(xì)胞生長依賴于IL-3或GM-CSF,對IL-5無反應(yīng),。多種淋巴因子和細(xì)胞因子對該細(xì)胞都有作用,,如:IL-1、IL-4,、IL-6,、IL-9、IL-11,、IL-13,、CSF、LIF,、NGF,。該細(xì)胞不表達(dá)血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由該細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞化學(xué)特征及珠蛋白基因的組成性表達(dá),,顯示該細(xì)胞屬于紅系,。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導(dǎo)細(xì)胞合成血紅蛋白,,TPA刺激細(xì)胞向巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞分化,。 | |||
STR位點 | Amelogenin:X,Y,;CSF1PO:12,,13;D13S317:8,,9,;D16S539:9,12;D18S51:13,;D19S433:14,,16;D21S11:30,;D2S1338:19,;D3S1358:15;D5S818:13,;D7S820:12,;D8S1179:11,15,;FGA:18,,19;TH01:7,,9,;TPOX:8;vWA:15,,17,; | |||
生物安全等級 | 1 | |||
細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
支原體檢測 | 無 | |||
保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-2003 DSMZ; ACC-334 ECACC; | |||
培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10%FBS+2ng/ml rhGM-CSF+1%PS | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,,液氮儲存 | |||
倍增時間 | ~36-72 hours | |||
染色體 | 78~104 | |||
細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,,1周左右 | |||
運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 | |||
供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁,,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后,需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清:抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,,棄去上清,,細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基)。 b,、剩下貼壁的細(xì)胞,,用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細(xì)胞1次,。 c,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細(xì)胞情況而定),,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,加少量培養(yǎng)基終止消化,。 d、按3mL/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無菌離心管中,,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 e、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中,。(次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 | ||
注意事項 | 懸浮細(xì)胞收貨注意事項: 1,、收貨時需鏡下拍照(看密度、狀態(tài)) 2,、靜置后需鏡下拍照(看整體密度) a.如密度50%以下,,建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%,建議換液培養(yǎng),,隔天觀察密度 c.如密度90%,,建議傳代 3、換液及傳代處理前,,培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細(xì)胞沉到瓶底),;收集上清,必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集,!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集,!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,,5min,。 4.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 5.因運輸問題,,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,,是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,; 2.為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,,請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 | ||
備注:客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話: 按 2,,我們隨時給予解答,。 | ||||
三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,,液氮儲存 | |||
細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,,加 1 mL血清重懸細(xì)胞,,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,,注意凍存管做好標(biāo)識。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,,若有異常,,及時調(diào)整實驗方案 | |||
四、售后服務(wù) | ||||
重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,,細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,,重發(fā),; 2.收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,,重發(fā),; 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,,經(jīng)核實后,,重發(fā); 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后,,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實后,,重發(fā),; 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,出現(xiàn)污染,,經(jīng)核實后,,重發(fā); 6.細(xì)胞活性問題,,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實后,,重發(fā),; 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,,不重發(fā),; 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā),; 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,,不重發(fā); 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,,不重發(fā); 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,,不重發(fā),; 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,,不重發(fā); 7.視具體情況而定,。 |