| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱(chēng) | NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱(chēng) | NK-92,；人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞,；NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來(lái)源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；50歲 | |||
| 組織來(lái)源 | 淋巴 | |||
| 生長(zhǎng)特性 | 懸浮生長(zhǎng) | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以?xún)?nèi) | |||
| 背景介紹 | NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株白細(xì)胞介素-2依賴(lài)型NK細(xì)胞株,。這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性,；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞(經(jīng)過(guò)照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能,。NK-92細(xì)胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽(yáng)性,，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性,。 | |||
| 注意事項(xiàng) | NK-92細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時(shí)間方可恢復(fù)狀態(tài),，凍存時(shí)密度盡量大些 | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12,；D13S317:9,12,；D16S539:11,12；D18S51:12,17,；D21S11:31.2,32,；D3S1358:15；D5S818:12,13,；D7S820:10,11,；D8S1179:12,15；FGA:20,22；PentaD:10,12,；PentaE:12,；TH01:6,9.3；TPOX:8,；vWA:16,18 | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 流式鑒定 |  | |||
| 生物安全等級(jí) | 2 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測(cè) | 無(wú) | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2408 ,；中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù) | |||
| 培養(yǎng)基 | NK92專(zhuān)用培養(yǎng)基（已添加IL2） | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 10%DMSO+50%FBS+40%培養(yǎng)基,，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 倍增時(shí)間 | ~40-50 hours | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主 | |||
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-3h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代,，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 搖晃培養(yǎng)瓶,，使NK-92細(xì)胞粗略混勻,，取NK-92細(xì)胞計(jì)數(shù)，按每毫升2-3x105個(gè)活細(xì)胞的細(xì)胞密度進(jìn)行全換液或半換液,。每48 h傳一次,。 | 37℃水浴融化后，750 rpm離心5 min,，棄凍存液,，加入培養(yǎng)基重懸，在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，起始密度為每毫升2-3x105個(gè)細(xì)胞 | ||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化,，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率,，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到NK-92細(xì)胞后,，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照）,，記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶(hù)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，有任何技術(shù)問(wèn)題可以技術(shù)服務(wù)電話(huà)： 按 2,，我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
| 三,、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液,，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | 凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%培養(yǎng)基,，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，取1×106~1×107個(gè)細(xì)胞,，750 rpm離心5 min,，棄原培養(yǎng)基，加入1 mL凍存液,，輕輕混勻,，標(biāo)注封口后，放入凍存盒,，置于-80℃24 h,，再置于液氮?dú)庀蟆?/td> | |||
| 注意事項(xiàng) | 1. IL-2分裝使用，避免反復(fù)凍融,； 2. 先配置不培養(yǎng)基：用的時(shí)候再將IL-2加入培養(yǎng)基中,； 3. 傳NK-92細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久,，小于1 h； 4. 重懸NK-92細(xì)胞要輕柔,，不要太劇烈,； 5. 不要加抗菌素,，若一定要加,，就加1%的青,； 6. 全換液比半換液好些，每48 h傳代一次,； 7. 培養(yǎng)該細(xì)胞一定要IL-2 100-200 U/ml,，IL-2濃度無(wú)需再增高,，過(guò)高會(huì)影響NK-92細(xì)胞生長(zhǎng)，也不能再降低,，過(guò)低細(xì)胞會(huì)死亡 | |||
| 四,、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開(kāi)封,，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶(hù)操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶(hù)嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的,，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,，不重發(fā),； 7.視具體情況而定。 | |||
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