一,、細(xì)胞基本屬性 | ||||
細(xì)胞名稱 | SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(STR鑒定正確) | |||
細(xì)胞別稱 | SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y;人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | |||
種屬來源 | 人 | |||
年齡性別 | 女,;4歲 | |||
組織來源 | 腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,,轉(zhuǎn)移部位骨髓 | |||
生長特性 | 半貼壁生長(貼壁和懸浮同時(shí)存在) | |||
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | |||
細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
背景介紹 | SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性,。SH-SY5Y細(xì)胞的飽和密度大于1X106細(xì)胞/cm2,。 | |||
STR位點(diǎn) | Amelogenin:X;CSF1PO:11,;D13S317:11,;D16S539:8,13,;D18S51:13,,16;D19S433:13,,14,;D21S11:31,31.2,;D2S1338:17,,19;D3S1358:15,,16,;D5S818:12;D7S820:7,,10,;D8S1179:15;FGA:23.2,24,;TH01:7,,10;TPOX:8,,11,;vWA:14,18,; | |||
生物安全等級(jí) | 1 | |||
特別備注 | 該細(xì)胞為貼壁和懸浮同時(shí)存在,,換液和傳代時(shí)需要分別回收貼壁和懸浮細(xì)胞。 | |||
細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
支原體檢測(cè) | 無 | |||
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2266 DSMZ; ACC-209 ECACC; ,;中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫 | |||
培養(yǎng)基 | 43%MEM+43%F12+10%FBS+1% MEM NEAA(非必需氨基酸)+1%丙酮酸鈉+1% GlutaMAX-1+PS | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳,;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 | |||
倍增時(shí)間 | ~48-72 hours | |||
抗原表達(dá)情況 | Blood Type A; Rh+ | |||
染色體 | 81~92 | |||
細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,,1周左右 | |||
運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨(T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用) 順豐快遞 | |||
供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,,絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后,,需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第三天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a,、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清:抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清,,細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基),。 b、剩下貼壁的細(xì)胞,,用不含鈣,、鎂離子的PBS輕輕潤洗細(xì)胞1次。 c,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細(xì)胞情況而定),,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,加少量培養(yǎng)基終止消化,。 d,、按3mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無菌離心管中,,1000 rpm離心5 min,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 e,、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中,。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜),。第三天換液并檢查細(xì)胞密度,。 | ||
注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 2.因運(yùn)輸問題,,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象,。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存; 2.為保證細(xì)胞的高存活率,,收到產(chǎn)品后,,請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后,,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,,干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),,細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照),,記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子等,,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。 | |||
備注:客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話: 按 2,我們隨時(shí)給予解答,。 | ||||
三,、細(xì)胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 | |||
細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。 b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,,輕輕混勻,,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
四,、售后服務(wù) | ||||
重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,,細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,,重發(fā); 2.收到細(xì)胞未開封,,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā),; 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),,發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實(shí)后,,重發(fā),; 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā),; 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實(shí)后,,重發(fā),; 6.細(xì)胞活性問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā),; 7.視具體情況而定,。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā),; 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,,不重發(fā),; 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā),; 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā),; 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,,不重發(fā); 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,,不重發(fā),; 7.視具體情況而定。 |