| 一,、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | y79人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | |||
| 細(xì)胞別稱 | y79；人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 視網(wǎng)膜 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 圓形,、成簇細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | 1971年1月,，該細(xì)胞由Reid TW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進行原代培養(yǎng)建立而成，此病人有很強的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的母系家族遺傳性,。該細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),，如核膜內(nèi)折,、三層膜結(jié)構(gòu)、大的被膜小泡,、環(huán)孔板,、微管、中心粒,、基粒等都與原始腫瘤相似,。 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 培養(yǎng)基 | RPMI-1640+20% FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨,，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 2.因運輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照）,，記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答,。 | ||||
| 三,、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞,，進行細(xì)胞計數(shù),。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5x;106~1x107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識,。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā),； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā),； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā),； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,，不重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
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