| 一,、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | SK-MEL-1人皮膚黑色素瘤細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | SK-Mel-1; SK Mel 1; SK-Mel 1; SK-Mel1; SKMEL-1; SkMEL-1; SKMEL1; SK 1 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男性,，29歲 | |||
| 組織來源 | 惡性黑色素瘤,；皮膚；源自轉(zhuǎn)移部位：淋巴系統(tǒng) | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 球形細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | SK-MEL-1細(xì)胞由Oettgen F及其同事從一名29歲的患有廣泛,、快速進(jìn)展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導(dǎo)管中分離建立的。該細(xì)胞可產(chǎn)生黑色素,，電鏡檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關(guān),。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對該細(xì)胞系的抗體。 | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X,，Y,；CSF1PO：12，13,；D13S317：11,；D16S539：11，12,；D18S51：13,，16；D19S433：15,，16.2,；D21S11：29,，32.2；D2S1338：19,，23,；D3S1358：14，16,；D5S818：12,，13；D7S820：12,；D8S1179：16,；FGA：18，20,；TH01：6,；TPOX：11；vWA：16,，17,； | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; HTB-67 DSMZ; ACC-303 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%MEM-EBSS+10%FBS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 倍增時(shí)間 | ~100小時(shí) | |||
| 致瘤性 | Yes, in nude mice; forms pigmented malignant melanomas; also forms tumors in the cheek pouch of cortisone treated hamsters. | |||
| 抗原表達(dá)情況 | Blood Type A; Rh+ | |||
| 染色體 | 53~73,，XY | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后,，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。 b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，棄去消化液,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 c,、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 d,、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | ||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化,，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
| 三,、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
| 四,、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封,，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問題,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問題,，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,，不重發(fā),； 7.視具體情況而定。 | |||
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