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研究背景

細(xì)胞能量代謝研究對(duì)于理解細(xì)胞代謝途徑和藥物作用機(jī)制具有重要意義,。能量代謝物（如ATP,、ADP等）在液相質(zhì)譜分析中易與金屬離子絡(luò)合，導(dǎo)致分析靈敏度降低,。

實(shí)驗(yàn)方法

1. 液相色譜條件：

   - 流動(dòng)相：A相為90%水（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸）,，B相為90%乙腈（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸）。

   - 流速：0.3 mL/min,。

   - 柱溫：40℃,。

   - 梯度洗脫：通過(guò)表1所示的時(shí)間和流動(dòng)相比例進(jìn)行梯度洗脫。

2. 質(zhì)譜條件：

   - 數(shù)據(jù)采集方法：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）,。

   - 離子源：電噴霧離子源（ESI）,，正負(fù)模式切換。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. 峰型和靈敏度：

   - 通過(guò)優(yōu)化流動(dòng)相條件（加入亞甲基二膦酸）,，顯著改善了能量代謝物的峰型,，提高了檢測(cè)靈敏度。

   - 正離子模式和負(fù)離子模式下目標(biāo)化合物的提取離子流圖分別見圖1和圖2,。

2. 數(shù)據(jù)分析：

   - 對(duì)12個(gè)細(xì)胞樣品（6個(gè)給藥組和6個(gè)對(duì)照組）進(jìn)行靶向分析,。

   - 通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析（p-value < 0.01和VIP > 1），篩選出92種顯著變化的代謝物,。

   - 熱圖（圖3）顯示,，給藥組和對(duì)照組之間存在顯著差異。在top 25化合物中,，給藥組中腺苷,、鳥苷等14種物質(zhì)含量升高，而脫氧鳥苷三磷酸,、甘氨酸等11種物質(zhì)含量降低,。

方法特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)

1. 檢測(cè)能力：

   - 在SCIEX Triple Quad™ 6500+系統(tǒng)上建立了330種能量代謝物的檢測(cè)方法，適用于高通量靶向分析,。

2. 性能優(yōu)勢(shì)：

   - 該系統(tǒng)具有高靈敏度和強(qiáng)抗基質(zhì)干擾能力,。

   - 簡(jiǎn)化了樣品前處理流程，回收率和儀器重復(fù)性良好,。

   - 本土化產(chǎn)品性能與進(jìn)口產(chǎn)品相當(dāng),，為能量代謝物的差異分析提供了快速可靠的方法。

結(jié)論

本文建立的檢測(cè)方法能夠高效準(zhǔn)確地分析細(xì)胞能量代謝物的變化,，為藥物作用機(jī)制研究提供了有力工具,。