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關(guān)于液相色譜柱使用中的

常見問題解答

Question

采用純有機試劑（如甲醇,、乙腈）,，從0.1mL/min流速慢慢提高到正常使用流速，沖洗總體積以20倍柱體積為宜，以便固定相能充分潤濕,、碳鏈舒展開,，使色譜柱的性能達到好狀態(tài)，并觀察壓力和基線狀態(tài),。

柱體積計算參照公式：

常見的色譜柱規(guī)格的柱體積計算如下：

正相色譜柱 (SIL, DIOL,，CN,，NH2）封存溶劑與質(zhì)控方法相關(guān)，不同的封存溶劑活化存在差異,，以島津現(xiàn)有的色譜柱為例,，具體活化方法如下：（可點擊預(yù)覽大圖）

不同方法如下：

采用HILIC模式對樣品進行分離分析,，一般用于分離大極性化合物,，因此對于極性大、吸附太強的雜質(zhì),，常規(guī)清洗效果不明顯,，可以加大水比例，增加洗脫強度,，先用純水：乙腈=50:50,，清洗20倍柱體積，然后梯度過渡到95%乙腈清洗,，并保存在該流動相中,。

當(dāng)流動相中使用了時間長,，且緩沖鹽使用較多；或者等度高比例水相一段時間造成了柱頭嚴重污染,，常規(guī)的沖洗難以達到一個好的效果,，此時可以進行反沖。

除非特殊情況,，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)相同的保護柱保護柱,，確保,，確保分離選擇性一致；規(guī)格選擇方面,，盡量選擇粒徑一致或者相近的保護柱,，且耐壓符合要求，保護柱體積按分析柱體積的5%~10%,，保護柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng),。

保護柱的再生一般采用，取下保護柱,，在不打開卡套的前提下將保護柱反接（注意此時不能接色譜柱）,，用10%甲醇水沖洗  30min，然后再用純甲醇沖洗30min,。

四氫呋喃（THF）在反相色譜中,，洗脫能力比甲醇和乙腈要強。實驗結(jié)果表明,，在流動相中加入THF能改善某些難分離的物質(zhì)的分離度及峰形,。

但是THF也存在不穩(wěn)定，易降解生成過氧化物,，從而導(dǎo)致峰形拖尾,、峰分裂以及鬼峰；同時過氧化物還可與填料發(fā)生化學(xué)作用,，一定程度上,，THF會對柱子造成損傷，而且這種損傷隨著時間而累積,；再者THF對PEEK有腐蝕作用,，因此添加濃度一般不超過20%。

1. 梯度變化造成的，在紫外低波長檢測的條件下會更容易出現(xiàn),，這種鬼峰比較固定,；一般磷酸鹽體系更容易出現(xiàn)鬼峰，建議添加鬼峰捕集小柱去除,。

2. 儀器中管路有氣泡也會容易產(chǎn)生鬼峰,，但這種鬼峰一般保留時間不固定，在進行實驗的時候，首先對流動相進行脫氣處理,，同時更換流動相后,，對儀器管線進行Purge。

樣品的降解變質(zhì),，以及樣品本身可能帶有的,，但因樣品批次問題可能不固定出現(xiàn)；需要進一步的排查,。

流動相,、儀器系統(tǒng)（包括手動進樣的進樣針）、色譜柱或樣品污染帶來的,，需要沖洗液相色譜系統(tǒng),。

殘留在柱子上，前一陣洗脫不全導(dǎo)致在下一針出峰,，從而導(dǎo)致鬼峰,，建議更換洗針液。

在線過濾器內(nèi)的濾芯是具有一定孔徑的篩板，死體積更小,，只能過濾掉一些大于篩板孔徑的雜質(zhì),。清洗的時候，只要取下篩板超聲即可,。

保護柱的卡套中放置的是保護柱芯,，柱芯內(nèi)有填料，相較于在線過濾器,，死體積更大,。保護柱芯不僅能過濾固體雜質(zhì)，還能吸附一些強極性,、強酸性或者強堿性的物質(zhì),，防止色譜柱內(nèi)填料的污染，可以對色譜柱進行保護,。

通常液相色譜柱的柱頭也有不同類型，常見的有HSS型以及W型,，大的差別在于連接所用的接頭管線伸出來長度有差異,，HSS型為2.4mm,W型則為3.3mm。當(dāng)使用一些不銹鋼接頭的時候,，接頭卡死導(dǎo)致伸出長度固定,，難以匹配不同類型色譜柱,。

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