在2024年美國質(zhì)譜會(ASMS)會議上,生命科學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域的創(chuàng)新者SCIEX推出了SCIEX 7500+系統(tǒng),,這是SCIEX定量產(chǎn)品組合中的新款質(zhì)譜儀,,延續(xù)了定量可靠靈敏的傳統(tǒng)。該系統(tǒng)為科學(xué)家提供了靈敏度與耐用性的雙重保障,。新的應(yīng)用文章表明7500+系統(tǒng)因?yàn)槌斓牟杉俣群挽`敏度,,能夠顯著提高高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析的定量準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和對于脂質(zhì)同分異構(gòu)體的色譜分辨率1,。
本文技術(shù)特點(diǎn):
展示了SCIEX 7500+系統(tǒng)下進(jìn)行約2000MRM離子對的高覆蓋脂質(zhì)掃描的功能和能力,。
1. SCIEX 7500+系統(tǒng)具有800 MRM/s的掃描速度,增強(qiáng)了高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)的定量性能,;
2. 相較于7500,,CV值小于20%的脂質(zhì)分子數(shù)量增加了59% ,提高了方法的穩(wěn)定性,;
3. 更快的掃描速度確保分析物色譜峰上的數(shù)據(jù)點(diǎn)更多,,從而產(chǎn)生更好的峰形狀,提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率,。
背景介紹
脂質(zhì)分析是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的分析過程,。首先脂質(zhì)數(shù)量眾多,約有大于>150,000個(gè)脂質(zhì),;其次生物體內(nèi)不同脂質(zhì)含量差異大,,含量跨度可達(dá)10-12個(gè)數(shù)量級,;脂質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣,且目前標(biāo)準(zhǔn)品不全,。質(zhì)譜法由于其靈敏度高,、特異性強(qiáng)、定量范圍寬等技術(shù)優(yōu)勢,,是目前用于脂質(zhì)分析的主流技術(shù),。
SCIEX新推出的7500+三重四極桿質(zhì)譜,提高了離子傳輸效率,,實(shí)現(xiàn)采集速度的大幅度提升,;同時(shí)兼具高靈敏度、快速極性切換和定量線性范圍寬等優(yōu)勢,。在此技術(shù)上,,開發(fā)了可以定性和定量約2000種脂質(zhì)分子的高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法。方法使用HILIC色譜進(jìn)行分離,,可有效減小脂質(zhì)共流出,,避免共流出組分的相互影響。掃描速度的提升不僅可以帶來更多的掃描點(diǎn)數(shù)從而提升定量的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性,,并且得到更好的峰形狀,,提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率。
采集方法
色譜使用Phenomenex Luna™ NH2 (100 x 2.1 mm, 2.6 µm)色譜柱. 流動(dòng)相A為二氯甲烷和乙腈(7/93, v/v),,流動(dòng)相B為二氯甲烷和乙腈(50/50, v/v,,含2mM乙酸銨)。
質(zhì)譜基于多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)掃描模式高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法,,使用 scheduled MRM (sMRM) 模式正負(fù)離子同時(shí)掃描,,檢測1925種脂質(zhì),其中正離子模式下822種,,負(fù)離子模式下1103種,。
結(jié)果與討論
1. 使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析提高了準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性
使用SCIEX 7500+系統(tǒng),儀器的MRM功能的快速采集速率可以實(shí)現(xiàn)每秒多達(dá)800個(gè)MRM轉(zhuǎn)換的分析,。如上圖所示,,SCIEX 7500系統(tǒng)在5ms的采集速度下,2種PE分子僅僅采集到1個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),。隨著儀器在使用7500+系統(tǒng)時(shí),,隨著掃描速度的提高,獲取的數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)量也隨之增加,。在3ms掃描速度下,,采集到了5個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),而在1.2 ms掃描速度下,,采集到了8個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),。有效地改進(jìn)了峰形,,提高了定量分析的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。這一觀察結(jié)果表明,,快速的MRM掃描速度對大規(guī)模的高覆蓋靶向組學(xué)分析至關(guān)重要,。
不同脂質(zhì)峰面積的定量的CV統(tǒng)計(jì)也表示采集度對于高覆蓋靶向組學(xué)分析的重要性。上圖顯示了5種不同脂類的示例分析物峰,,計(jì)算了5次連續(xù)進(jìn)樣峰面積CV值。在不同掃描速度下,,以3ms掃描速度分析的各分析物的CV值低,。在使用5 ms掃描速度的實(shí)驗(yàn)中,分析物峰上收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)較少,,導(dǎo)致一些分析物的峰形失真,,導(dǎo)致CV值變大。因此,,更快的MRM掃描速度提高了準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性,,全新的7500+系統(tǒng)結(jié)合自動(dòng)化的分析軟件提供了更實(shí)用高覆蓋靶向組學(xué)解決方案。
2. 使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率,。
圖A為1-和2-lysoPC(18:1)的4個(gè)采集速度的XIC,。如藍(lán)色所示,在1.2 ms掃描速度下獲得的數(shù)據(jù)顯示為異構(gòu)體的兩個(gè)不同的峰,。隨著掃描速度的降低,,在兩個(gè)峰上采集的數(shù)據(jù)點(diǎn)也隨之減少。在5 ms的掃描速度下(綠色),,兩個(gè)不同的峰不再被色譜分辨,,于是丟失了脂質(zhì)異構(gòu)體的定量信息。
圖B所顯示的上一行的XIC上異構(gòu)體1-lysoPC(16:0)為主要峰,前面的小峰為異構(gòu)體2-lysoPC(16:0),。在5 ms的掃描速度下,,兩個(gè)異構(gòu)體之間的分離消失了。lysoPC(18:1)也有類似的情況存在(圖B下一行),。在5 ms的掃描速度下,,收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)太少,無法確定是否存在異構(gòu)體,。隨著掃描速度的提升,,采集點(diǎn)數(shù)也隨之提升,于是異構(gòu)體得以被分辨,。同時(shí)結(jié)果顯示較慢的掃描速度導(dǎo)致分析物CV也顯著更高,,會產(chǎn)生顯著的定量誤差。因此使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行快速采集的脂質(zhì)組學(xué)分析提高了脂質(zhì)異構(gòu)體的色譜分辨率,。
結(jié)論
與傳統(tǒng)非靶脂質(zhì)組學(xué)方法相比,,靶向脂質(zhì)組學(xué)分析脂質(zhì)使用簡便,、靈敏度高,并且能夠準(zhǔn)確地識別和量化脂質(zhì),,高覆蓋的靶向組學(xué)分析被越來越多地監(jiān)測生物樣品中的代謝和脂質(zhì),。以上這些結(jié)果表明,SCIEX 7500+系統(tǒng)可以提高方法的準(zhǔn)確度,、穩(wěn)定性和脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率,,同時(shí)增加脂質(zhì)測定的覆蓋范圍,整體提升高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)質(zhì)量,。
1. Fast scanning quantitative lipidomics analysis using the SCIEX 7500+ system. 2024 SCIEX TN: MKT-32067-A.
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