導讀
為了保障人們的食品安全，農業(yè)農村部 發(fā)布了《GB 31658.20-2022 食品安全國家標準 動物性食品中酰胺醇類藥物及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》,，該標準自2023年2月1日開始已正式實施,。然而小編在走訪客戶時，發(fā)現(xiàn)不少實驗室在分析該類化合物的時候,，不約而同出現(xiàn)了以下問題：
主管,，這個實驗我做外標法線性非常好，內標法線性除了氯霉素都不太好呢,？
加入的內標物也是混標吧,，按理說不會是每種物質的體積加入有偏差呀？
恩,，是加的混標,，我試過好幾遍了，結果每次都是這樣,。
是不是有剛好那三個物質的保留時間有干擾物質？
也不是,，我試過另外一對離子對,，還更換過色譜柱和梯度，也是同樣現(xiàn)象,。
那內標響應有什么規(guī)律么,？
這個還真有，隨著目標物濃度的不斷提高,，內標物的響應也是不斷增大,。
這倒是個有趣的現(xiàn)象，咱們把這個問題努力攻克一下,！
酰胺醇類藥物
酰胺醇類藥物又稱氯霉素類抗生素,，屬于廣譜抗生素,，常見的該類藥物主要包括氯霉素、甲砜霉素,、氟苯尼考等,。農業(yè)農村部公告第250號已明確將氯霉素列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》。甲砜霉素為氯霉素類衍生物,，而氟苯尼考是新一代氯霉素類抗生素,，氟苯尼考胺是其主要代謝產(chǎn)物。根據(jù)《GB 31658.20-2022》,，除氯霉素的內標選擇是氯霉素-D5外,，其它3種均是采用的都是其-D3的內標物。
表1. 常見酰胺醇類藥物
酰胺醇類分析難點
從以上化學式可以看到,，該類物質都含有一個或兩個氯元素,，而氯元素非常顯著的特點則是有Cl35和Cl37的同位素。
我們以氟苯尼考為例,，上圖和下圖分別為氟苯尼考標樣和氟苯尼考D3內標的質譜圖,，可以看到，氟苯尼考除了在m/z 356和m/z 358處有較高響應外,，在m/z 359處也有一定響應,，而m/z 359正是氟苯尼考-D3的母離子。那么,，氟苯尼考在m/z 359的響應是否會對內標物氟苯尼考-D3的響應造成干擾,，從而導致了這一問題的產(chǎn)生？
為此,，我們設計了一個小實驗,。只進標樣溶液（不含內標），我們看到其在內標通道也是有響應的,，以下是10 ng/mL氟苯尼考的色譜圖,，氟苯尼考在定量通道上的峰面積是3457270，而在內標通道上的峰面積達到296836,，占比8.6%,。這樣也就不難理解隨著目標物濃度的不斷提高，內標的響應也會隨之增大了,，這樣的情況下,，內標法得到的線性曲線當然不佳了。
島津解決方案
如何解決這些含氯化合物-D3同位素內標因目標組分帶來的響應干擾問題,？比較簡單的方法是避開受到干擾的離子而選擇其它離子作為母離子,，如氟苯尼考-D3，選擇m/z 361作為母離子，因為氟苯尼考對m/z 361離子的貢獻更小,。下表為化合物新選擇的離子對信息,。
表2. 酰胺醇類藥物內標推薦離子對信息
改變成新的離子對信息后，甲砜霉素,、氟苯尼考和氟苯尼考胺的線性改善非常明顯,，這樣內標法的線性不佳問題就妥妥的解決啦！
總結
看了本期的難點項目經(jīng)驗分享,，相信大家都有所了解,，如果分析的化合物中含有氯或溴元素時，可要小心了,，經(jīng)?？赡艹霈F(xiàn)因為內標離子通道選擇的不合適，造成目標物的同位素峰與內標物的質量數(shù)發(fā)生重疊的問題,，從而影響到線性乃至定量有偏差,。因此在分析這類化合物時，尤其是化學式中含有不止一個氯或溴元素的物質時,，建議大家可以盡量購買含氘代,、13C或15N個數(shù)比較多的同位素內標，另一方面,，當化合物在內標的通道有干擾時,，我們也可以選擇[M-H+2]-作為內標的母離子而不是基峰[M-H]-。
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撰稿人：駱丹
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