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引言 
        脂溶性維生素(Liposoluble Vitamins) 包括維生素A、維生素D,、 維生素E,、維生素K，不溶于水而溶于脂肪及有機(jī)溶劑,，由長的碳 氫鏈或稠環(huán)組成的聚戊二烯化合物,。維生素是維持身體健康所必需 的一類有機(jī)化合物。這類物質(zhì)在體內(nèi)既不能是構(gòu)成身體組織的原 料，也不是能量的來源,，而是一類調(diào)節(jié)物質(zhì),，在物質(zhì)代謝中起重要 作用。維生素A：維持正常視覺,，維持上皮細(xì)胞,、組織完整，增強(qiáng) 機(jī)體免疫力,，參與鐵代謝,；維生素E：抗氧化、清除自由基,，保護(hù) 神經(jīng)功能,，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，維持正常生育功能,；維生素D：維持 骨骼發(fā)育,，調(diào)節(jié)抗原提呈細(xì)胞的分化、淋巴細(xì)胞的增值,，影響免疫 力,、智力發(fā)育；維生素K：參與凝血因子的合成,，參與骨鈣素的合 成,。 
        本方法采用液液萃取方法對生物樣本進(jìn)行前處理，然 后SCIEX液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)系統(tǒng),，以待測目標(biāo)物的同位素 標(biāo)記物為內(nèi)標(biāo),，檢測人血清中維生素A (VA)、25-羥基維生素 D2（25OHVD2）,、25-羥基維生素D3（25OHVD3）,、維生素E （VE）、維生素K1 (VK1),。

實(shí)驗(yàn)部分
        樣品處理：向1.5 mL EP管中,，依次加入10 μL內(nèi)標(biāo)工作液(表 2)、50 μL全血和140 μL甲醇,；渦旋20秒,，混勻；再加入0.6 mL正己 烷,，3,000 r/min渦旋100 s,，然后10,000 rpm離心3分鐘；取離心后 的上清液,，在氮?dú)庀麓蹈伞堅(jiān)?00 μL 80%甲醇復(fù)溶、離心,， LC-MS/MS進(jìn)樣20 μL分析,。 

色譜條件：        
        色譜柱使用Phenomenex kinetex C18 column (50×3.0 mm, 2.6 μm）進(jìn)行分離，流動相選用水（含0.1% 甲酸）作為A相,，和 甲醇（含0.1% 甲酸）作為B相,，柱溫設(shè)為40 ℃，進(jìn)樣量為20 μL,； 進(jìn)行梯度洗脫,，液相梯度見表2。
 

質(zhì)譜條件：
        使用SCIEX TripleQuad™ 4500MD質(zhì)譜系統(tǒng),。采用Heated Nebulizer（APCI）和多反應(yīng)監(jiān)測（Multiple Reaction Monitoring,， MRM）模式進(jìn)行質(zhì)譜掃描。離子源參數(shù)：加熱氣（GS1）為 60 psi,，脫溶劑氣溫度為550 ℃,；氣簾氣（Curtain Gas，CUR） 為35 psi,，碰撞氣（Collision Gas,，CAD）為6 psi；霧化器電流 （Nebulizer Current, NC)：5 μA,。為了獲取較好的穩(wěn)定性和靈敏度,，各化合物監(jiān)測離子對的去簇電壓（Declustering Potential， DP）和碰撞電壓（Collision Energy,，CE）,，目標(biāo)物定量離子對、定 性離子對以及內(nèi)標(biāo)物監(jiān)測離子對等參數(shù)均經(jīng)過系統(tǒng)優(yōu)化,，離子對信 息見表3,。
 

結(jié)果與討論
        圖1 VA、25OHVD2,、25OHVD3,、VE和VK1在定量下限LOQ提 取離子流圖。圖2是人全血中VA,、25OHVD2,、25OHVD3、VE和 VK1的提取離子流色譜圖,，峰型對稱,，響應(yīng)良好。
        VA,、25OHVD2,、25OHVD3、VE和VK1回歸方程和線性范圍見 表3，VA,、25OHVD2,、25OHVD3、VE和VK1在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi) 線性良好,，r均大于0.996,。
 

        為了考察方法的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性，分別進(jìn)行VA,、25OHVD2,、 25OHVD3、VE和VK1的精密度(RSD)和準(zhǔn)確度方法驗(yàn)證,。從表4可以 看出,，VA、25OHVD2,、25OHVD3,、VE和VK1低、中,、高濃度的精 密度均在10%以內(nèi),，準(zhǔn)確度均在88-108%之內(nèi)。
 

總結(jié)
本方法使用SCIEX 高靈敏度和高穩(wěn)定性的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系 統(tǒng),，實(shí)現(xiàn)了同時(shí)檢測人全血中VA,、25OHVD2、25OHVD3,、VE和 VK1濃度,，本方法可對人全血中脂溶性維生素進(jìn)行快速的定性和定 量分析。該方法具有線性好,、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn),，且每個(gè)樣本分析僅 需6.5 min，具有較高的分析通量,。
 

來源：SCIEX中國公司