熒光免疫分析原理及優(yōu)點
熒光免疫檢測技術(shù)具有專一性強,、靈敏度高,、實用性好等優(yōu)點,,因此它被用于測量含量很低的生物活性化合物,,例如蛋白質(zhì)(酶、接受體,、抗體),、激素(甾族化合物,、甲狀腺激素、酞激素),、藥物及微生物等,。
熒光免疫分析原理
作為免疫分析法的一種,F(xiàn)IA同樣存在兩種模式,,即競爭型和夾心型,。其中競爭型(以標(biāo)記抗原的競爭型為例)的測定原理是基于未標(biāo)記的抗原(Ag)和標(biāo)記抗原(Ag-L)競爭結(jié)合有限的抗體(Ab)而實現(xiàn)的免疫分析法,。檢測時,,Ab和Ag-L的濃度是固定的,。當(dāng)未標(biāo)記的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag和Ab的結(jié)合使得Ag-L與Ab的免疫復(fù)合物的量減少,。樣品中存在的Ag越多,,Ab結(jié)合的Ag-L便越少,從Ab-Ag-L免疫復(fù)合物的減少或游離Ag-L的增加,,可以定量測定出樣品中待測抗原的含量,。其反應(yīng)過程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
對夾心型免疫分析來說,其反應(yīng)原理是在免疫反應(yīng)的載體上固定過量的Ab,,然后加入一定量的Ag,,免疫反應(yīng)后,,再加入過量的標(biāo)記抗體(Ab-L),以形成“三明治”式夾心免疫復(fù)合物,。樣品中存在的Ag越多,,結(jié)合的Ab-L也越多,夾心免疫復(fù)合物的標(biāo)記熒光信號就越強,。反應(yīng)過程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L,。