利用人血清白蛋白融合技術(shù),制備一種在體內(nèi)半衰期長(zhǎng),生物學(xué)活性高的長(zhǎng)效研究重組人血清白蛋白.干擾素α2b融合蛋白,可用于病毒性肝炎,腫瘤等相關(guān)疾病的治療.重組人血清白蛋白‐干擾素α2b融合蛋白是一種新型,、長(zhǎng)效、具有抗病毒,、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子其半衰期較天然的干擾素α2b長(zhǎng)且干擾素抗體的產(chǎn)生時(shí)間相對(duì)較晚在臨床上對(duì)患者本次實(shí)驗(yàn)使用的樣品為康寶集團(tuán)客戶(hù)提供的三個(gè)批次的重組人血清蛋白與干擾素α-2b融合蛋白樣品(編號(hào):rIFNα-2b-HAS 20161101,、 rIFNα-2b-HSA 20161102、 rIFNα-2b-HSA 20161203),,主要進(jìn)行蛋白的分離和定性定量實(shí)驗(yàn),。
1.實(shí)驗(yàn)條件儀器:LUMEX Capel 205毛細(xì)管電泳儀
毛細(xì)管條件:長(zhǎng)度42 cm,,內(nèi)徑75 um
分析波長(zhǎng):280 nm
分析電壓:15 kV
分析溫度:20℃
進(jìn)樣條件:30 mbar進(jìn)樣10秒
分析時(shí)間:9 min
緩沖液:15 mmol磷酸鹽緩沖液
2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程
取HAS 20161101批樣品,分別通過(guò)原液稀釋2倍,,4倍,,8倍,16倍,,共5個(gè)濃度濃度,,濃度分別為236.25、472.5,、945,、1890和3780 mg/L。按照設(shè)置的條件進(jìn)行分析,,每個(gè)樣品重復(fù)進(jìn)樣3次,。
空白:取水作為空白對(duì)照溶液。進(jìn)樣2次,。按照此分析程序及條件,,樣品的圖譜如下:下:
從以上的結(jié)果圖譜中可以看出,在所應(yīng)用的條件下基本能夠分析出樣品,,樣品的遷移時(shí)間在7-8 min左右,,三次進(jìn)樣的平行性非常好。
通過(guò)不同濃度樣品的濃度以及峰面積通過(guò)外標(biāo)法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制,儀器軟件結(jié)果如下:
圖中可以看出,,樣品的曲線(xiàn)情況,,線(xiàn)性系數(shù)R= 0.9995、0.9999和0.9995,, 滿(mǎn)足分析的要求,,相對(duì)偏差比較小。
此次換了毛細(xì)管和緩沖液進(jìn)行分析,,比之前時(shí)間晚一些,。如果更換換柱子可能時(shí)間會(huì)有所不同,但是對(duì)分析影響不大,。本條件是本次實(shí)驗(yàn)所應(yīng)用,,條件后期還應(yīng)該可以進(jìn)行優(yōu)化和設(shè)置,,可以采用不同的毛細(xì)管及SDS條件進(jìn)行條件的優(yōu)化,。
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