使用超濾離心管時(shí)所需要注意的事項(xiàng)

閱讀：3840發(fā)布時(shí)間：2021-1-20

　?。?）選擇合適的超濾離心管,。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,，比如目的蛋白分子量為35kDa,，就可以選擇10kDa截留分子量的產(chǎn)品,。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管,。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同,。

　?。?）新買來(lái)的超濾是干燥的，使用前加入超純水,，水量*過(guò)膜,，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,，即可加入蛋白液,，加入的多少，以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn),。操作要輕,，加入蛋白液前，需要插在冰上預(yù)冷,。

　?。?）平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡,。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,，否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾（離心機(jī)預(yù)冷至4度）,。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后，有所不同,。離心機(jī)的加速度調(diào)至低檔，減小對(duì)膜的壓力,。注意,，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機(jī),，否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí),，無(wú)法馬上處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說(shuō)明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）,。在實(shí)際使用中,，一般轉(zhuǎn)速開的比說(shuō)明書里的要低,，這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。

　?。?）當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿,，看有沒(méi)變藍(lán)色,，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要準(zhǔn)確判斷是否漏管,，用5mgml的BSA離心10min,，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作,，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止,。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,，要確定沉淀的具體原因,，是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾離心管同時(shí)超濾,，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止,。

　　以上就是小編今天為大家?guī)?lái)的全部資料,，希望能夠讓您更好的了解本產(chǎn)品。

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