在使用超濾離心管時您所需要注意的事項分析

閱讀：2500發(fā)布時間：2020-3-3

　　新買來的超濾離心管是干燥的,，使用前加入超純水，水量*過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘,。然后將水倒出，即可加入蛋白液,，加入的多少,，以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕,，加入蛋白液前,，需要插在冰上預冷。

　　不同離心機的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后,，有所不同,。離心機的加速度調(diào)至低檔，減小對膜的壓力,。注意,，一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機,，否則離心機出問題時,，無法快速處理,。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整。在實際使用中,，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,，這樣可以延長離心管的使用壽命。

　　當濃縮到剩下1ml時,，取50ul緩沖溶液,，加入10ul流穿，看有沒變藍色,，以此判斷超濾離心管是否漏掉蛋白,。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管,，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿,，跑蛋白膠或Bradford粗測,，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮，直到所有濃縮液都加完為止,。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導致堵管。若發(fā)生沉淀,，要確定沉淀的具體原因,，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾離心管同時超濾,，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止,。

　　前面幾步用以濃縮蛋白,，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,，輕輕加入新的Buffer,，再濃縮至1ml左右，連續(xù)三次,，后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況,。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的,。

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