流式細(xì)胞儀(flow cytometry,，F(xiàn)CM)是測量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀,，是在單個(gè)細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對(duì)細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu),、DNA、RNA,、蛋白質(zhì),、抗原等)進(jìn)行快速測量并可分類收集的高技術(shù)。
工作原理簡介：采用激光作為激發(fā)光源,，其具有更好的單色性與激發(fā)效率,；利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，檢測的靈敏度和特異性,；用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)的單細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析,，了檢測速度與統(tǒng)計(jì)分析性。
流式細(xì)胞儀主要由以下五部分構(gòu)成：①流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng),；②激光光源及光束形成系統(tǒng),；③光學(xué)系統(tǒng)；④信號(hào)檢測與存儲(chǔ),、顯示,、分析系統(tǒng)；⑤細(xì)胞分選系統(tǒng),。
其中激光光源及光束形成系統(tǒng)：流式細(xì)胞儀可配備一根或多根激光管,，常用的激光管是氬離子氣體激光管，它的發(fā)射光波長488nm,，此外可配備氦氖離子氣體激光管(波長633nm)和/或紫外激光管,。
流式細(xì)胞儀的主要測定信號(hào)熒光是由激發(fā)光激發(fā)的，熒光信號(hào)的強(qiáng)弱與激發(fā)光的強(qiáng)度和照射時(shí)間相關(guān),，激光是一種相干光源,，它能提供單波長、高強(qiáng)度,、高穩(wěn)定性的光照,，正是能達(dá)到這一要求的理想的激發(fā)光光源。
在激光光源和流動(dòng)室之間有兩個(gè)圓柱形透鏡,，將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm),，在這種橢圓形激光光斑內(nèi)激光能量成正態(tài)分布，使通過激光檢測區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致,。
光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡,、小孔,、濾光片組成，大致可分為流動(dòng)室前和流動(dòng)室后兩組,。
流動(dòng)室前的光學(xué)系統(tǒng)由透鏡和小孔組成,，透鏡和小孔(一般為2片透鏡、1個(gè)小孔)的主要作用是將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束,，使激光能量成正態(tài)分布,，使通過激光檢測區(qū)的細(xì)胞受照強(qiáng)度一致，大限度的減少雜散光的干擾,；流動(dòng)室后的光學(xué)系統(tǒng)主要由多組濾光片組成,，濾光片的主要作用是將不同波長的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管。
濾光片主要有三類：長波通(LPF)--只允許特定波長以上的光線通過,，短波通(SPF)--只允許特定波長以下的光線通過,，帶通(BPF)--只允許特定波長的光線通過,，不同組合的濾片可以將不同波長的熒光信號(hào)送到不同的光電倍增管(PMT),，如接收綠色熒光(FITC)的PMT前面配置的濾光片是LPF550和BPF525，接收色橙紅色熒光(PE)的PMT前面配置的濾光片是LPF600和BPF575,，接收紅色熒光(CY5)的PMT前面配置的濾光片是LPF650和BPF675,。
流式細(xì)胞儀發(fā)明的初期，主要應(yīng)用在對(duì)細(xì)胞的分選上,，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù),，免疫學(xué)的發(fā)展以及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明，隨后才在生物學(xué)和醫(yī)學(xué),、藥學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛,，如細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析、細(xì)胞調(diào)亡,、細(xì)胞分型,、腫瘤的診斷、藥物療效分析等許多領(lǐng)域,。近年來,，新型多功能流式細(xì)胞儀的開發(fā)，多參數(shù)分析技術(shù)的建立,，以及各種功能強(qiáng)大的分析軟件的開發(fā)等,，為流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果性的提高和分析能力的擴(kuò)展提供了保障，可以相信,，在未來生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,，流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大，應(yīng)用深度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng),。
