流式細胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)是測量染色細胞標(biāo)記物熒光強度的細胞分析儀,，是在單個細胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對細胞的物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小,、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA,、RNA、蛋白質(zhì),、抗原等)進行快速測量并可分類收集的高技術(shù),。
工作原理簡介：采用激光作為激發(fā)光源,，其具有更好的單色性與激發(fā)效率,；利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù),，檢測的靈敏度和特異性,；用計算機系統(tǒng)對流動的單細胞懸液中單個細胞的多個參數(shù)信號進行數(shù)據(jù)處理分析，了檢測速度與統(tǒng)計分析性,。
流式細胞儀主要由以下五部分構(gòu)成：①流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng),；②激光光源及光束形成系統(tǒng),；③光學(xué)系統(tǒng),；④信號檢測與存儲、顯示,、分析系統(tǒng),；⑤細胞分選系統(tǒng)。
其中激光光源及光束形成系統(tǒng)：流式細胞儀可配備一根或多根激光管,，常用的激光管是氬離子氣體激光管,，它的發(fā)射光波長488nm，此外可配備氦氖離子氣體激光管(波長633nm)和/或紫外激光管,。
流式細胞儀的主要測定信號熒光是由激發(fā)光激發(fā)的,，熒光信號的強弱與激發(fā)光的強度和照射時間相關(guān)，激光是一種相干光源,，它能提供單波長,、高強度、高穩(wěn)定性的光照,，正是能達到這一要求的理想的激發(fā)光光源,。
在激光光源和流動室之間有兩個圓柱形透鏡，將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm),，在這種橢圓形激光光斑內(nèi)激光能量成正態(tài)分布,，使通過激光檢測區(qū)的細胞受照強度一致。
光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡,、小孔,、濾光片組成，大致可分為流動室前和流動室后兩組,。
流動室前的光學(xué)系統(tǒng)由透鏡和小孔組成,，透鏡和小孔(一般為2片透鏡、1個小孔)的主要作用是將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束,，使激光能量成正態(tài)分布,，使通過激光檢測區(qū)的細胞受照強度一致，大限度的減少雜散光的干擾,；流動室后的光學(xué)系統(tǒng)主要由多組濾光片組成,，濾光片的主要作用是將不同波長的熒光信號送到不同的光電倍增管。
濾光片主要有三類：長波通(LPF)--只允許特定波長以上的光線通過，短波通(SPF)--只允許特定波長以下的光線通過,，帶通(BPF)--只允許特定波長的光線通過,，不同組合的濾片可以將不同波長的熒光信號送到不同的光電倍增管(PMT)，如接收綠色熒光(FITC)的PMT前面配置的濾光片是LPF550和BPF525,，接收色橙紅色熒光(PE)的PMT前面配置的濾光片是LPF600和BPF575,，接收紅色熒光(CY5)的PMT前面配置的濾光片是LPF650和BPF675。
流式細胞儀發(fā)明的初期,，主要應(yīng)用在對細胞的分選上,，隨著計算機技術(shù)，免疫學(xué)的發(fā)展以及單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明,，隨后才在生物學(xué)和醫(yī)學(xué),、藥學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛，如細胞動力學(xué)分析,、細胞調(diào)亡,、細胞分型、腫瘤的診斷,、藥物療效分析等許多領(lǐng)域,。近年來，新型多功能流式細胞儀的開發(fā),，多參數(shù)分析技術(shù)的建立,，以及各種功能強大的分析軟件的開發(fā)等，為流式細胞儀檢測結(jié)果性的提高和分析能力的擴展提供了保障,，可以相信,，在未來生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，流式細胞儀的應(yīng)用范圍會進一步擴大,，應(yīng)用深度會進一步加強,。
