TRITC標(biāo)記多糖--葡聚糖 聚蔗糖 透明質(zhì)酸
一,、TRITC葡聚糖
化學(xué)名：
四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 葡聚糖
葡聚糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
四甲基羅丹明B硫代氨基甲酰基 - 葡聚糖
結(jié) 構(gòu):
特性：
通過與四甲基羅丹明B異硫氰酸酯（混合異構(gòu)體）偶聯(lián),，利用特選葡聚糖組分制備得到了TRITC-葡聚糖,。 DS（TRITC）的范圍從0.001到0.008。 在這一低取代度范圍下,，羅丹明部分叔氨基的電荷貢獻(xiàn)可以忽略不計,。審查了所有批次的分子量、干燥失重和游離TRITC,。
光譜數(shù)據(jù)
激發(fā)在550nm下進(jìn)行,，而熒光測量在572nm處進(jìn)行（見圖12）。我們實驗室的研究表明：TRITC-葡聚糖溶液的熒光在pH 3-9的范圍內(nèi)只有輕微的變化（見圖13）,。這在進(jìn)行定量測量時很有意義,。在生物介質(zhì)中進(jìn)行測量可能會顯著影響熒光強(qiáng)度，其有可能會增強(qiáng),，也有可能會減弱,。
圖12. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中,，TRITC-葡聚糖的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：550nm,；發(fā)射波長：572 nm,。
圖13 TRITC-葡聚糖的熒光強(qiáng)度（em.572nm）與pH的關(guān)系,。
儲存和穩(wěn)定性：
TRITC-葡聚糖的穩(wěn)定性尚未有任何詳細(xì)研究,，但據(jù)推測其與FITC-葡聚糖應(yīng)較為相似,，因為兩種物質(zhì)的取代基均通過硫代氨基甲?；鶈卧M(jìn)行連接。只有在高pH（> 9）和高溫下,，硫代氨基甲?；I才存在水解的風(fēng)險（參見FITC-葡聚糖）。 TRITC-葡聚糖溶液（pH 6-7）可以在室溫,、黑暗中儲存數(shù)周,。儲存在密封容器、黑暗中的干燥粉末保質(zhì)期為5年,。
TRITC-葡聚糖的應(yīng)用：
TRITC-葡聚糖主要用于細(xì)胞,、血管和組織中的滲透性和運(yùn)輸研究。熒光的測量可以通過活體熒光顯微鏡定量和實時進(jìn)行,。該技術(shù)具有高靈敏度,，可以檢測到組織液中濃度低至1μg/ ml的物質(zhì),。另一個重要的特性是TRITC-葡聚糖不會結(jié)合在動脈壁上54,55。
人們已證明倉鼠頰囊的微血管是由各種炎癥條件所引起的血漿滲漏的有用研究模型,。使用合適的過濾器（490 / 520nm）,，可以通過活體熒光顯微鏡檢查臉頰囊，并用數(shù)碼相機(jī)拍攝圖像（參見圖14）,。靜脈內(nèi)給予5％TRITC-葡聚糖150生理鹽水溶液（約100mg / kg體重）56-58,。。有關(guān)該技術(shù)的更多信息,，請參閱Thorball3,。 TRITC-葡聚糖已被廣泛應(yīng)用于組織和細(xì)胞的滲透性研究，我們只隨機(jī)選擇了少部分參考文獻(xiàn)供您使用59-65,。
圖14. 在組胺攻擊15分鐘后,，將TRITC-葡聚糖150注射到倉鼠臉頰處,。 （已獲得E.Svensjö許可）
二：TRITC-聚蔗糖（TRITC-Ficoll®）
化學(xué)名：
四甲基羅丹明異硫氰酸酯 - 聚蔗糖
聚蔗糖(3´,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
四甲基-羅丹明B硫代氨基甲酰基-聚蔗糖
結(jié) 構(gòu):
特性：
TRITC-聚蔗糖是一種聚蔗糖衍生物,，其是通過蔗糖與表氯醇交聯(lián)合成的聚合物,。 TRITC-聚蔗糖通過聚蔗糖與TRITC反應(yīng)制備而成，反應(yīng)條件與TRITC-葡聚糖的條件相似,。 TRITC-聚蔗糖可以在很寬的pH范圍內(nèi)易溶于水和鹽溶液,。 聚蔗糖比葡聚糖對酸更敏感，因此在酸性pH范圍下工作時還請務(wù)必小心,。其以易溶于水的紅色粉末形式供應(yīng),。
光譜數(shù)據(jù)：
圖15. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（11mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中,，TRITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：522nm,；發(fā)射波長：552 nm,。
儲存和穩(wěn)定性：
在室溫、氣密容器中,，TRITC-聚蔗糖粉至少可以穩(wěn)定儲存6年,。關(guān)于TRITC-聚蔗糖在溶液中的穩(wěn)定性尚未有任何詳細(xì)研究報道。然而,，四甲基若丹明部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲?；B接基團(tuán)的穩(wěn)定性類似于葡聚糖上連接基團(tuán)（參見TRITC-葡聚糖）的穩(wěn)定性。但由于蔗糖中糖苷鍵的不穩(wěn)定性，所以不建議將聚蔗糖基產(chǎn)品儲存在低pH環(huán)境下,。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌,。
TRITC-聚蔗糖的應(yīng)用：
TRITC-聚蔗糖與FITC-聚蔗糖的應(yīng)用基本相似，但其還具有某些優(yōu)點,。如前所述,，與FITC標(biāo)記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小,。另外，更長的發(fā)射波長還能避免實驗環(huán)境中的背景干擾,。
TRITC-聚蔗糖 70已用于腎內(nèi)皮屏障研究66,67,。TRITC-Ficolls也已用于了胸腺非依賴性抗原的抗體應(yīng)答研究68。
三：四甲基羅丹明透明質(zhì)酸（TR-HA）
化學(xué)名：
四甲基羅丹明透明質(zhì)酸
透明質(zhì)素,6´雙（四甲基氨基）-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)
四甲基羅丹明B透明質(zhì)酸
結(jié) 構(gòu):
特性:
自馬鏈球菌中提取的透明質(zhì)酸是一種由β（1-3）葡糖苷酸和β（1-4）氨基葡萄糖苷單元交替組成的多糖,，對其用氨基-四甲基羅丹明進(jìn)行標(biāo)記,，得到可溶于水和電解質(zhì)的紅色產(chǎn)品。 DS在0.001到0.008之間,。 用GPC系統(tǒng)測定的分子量（用葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)樣校準(zhǔn)）Mw為6.0×106,。
光譜數(shù)據(jù):
圖16. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（12mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中,，TR-HA的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：552nm,；發(fā)射波長：576 nm,。
四甲基羅丹明透明質(zhì)酸應(yīng)用：
四甲基羅丹明透明質(zhì)酸（TR-HA）與熒光素透明質(zhì)酸（見前面部分）的應(yīng)用基本相似，但其還具有某些優(yōu)點,。如前所述,，與FITC標(biāo)記物相比，四甲基若丹明的熒光對pH的依賴性較小,。另外,，更長的發(fā)射波長還能避免實驗環(huán)境中的背景干擾。TR-HA和雙光子成像已用于腦組織的侵入性生長研究中69,。
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