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產(chǎn)品簡介
人ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性
詳細(xì)介紹
人ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,，也可用于測定抗體,。
測試要求：
做好對照：正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,，說明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
在ELISA中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,，其中包括:
1、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
2） 包被抗體或抗原）的選擇：將抗體或抗原）吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml,。
3、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定見酶標(biāo)記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
4,、酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無色,。有些供氫體如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入,。