酶聯(lián)免疫試劑盒是酶免疫測定技術(shù)中應用廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
酶聯(lián)免疫試劑盒主要有:1)自身免疫檢測試劑盒,,包括ELISA和IFA類診斷試劑,;2)細胞因子ELISA試劑盒,包括人,、大鼠,、小鼠、兔,、狗,、羊、猴子、豬,、豚鼠,、馬類血清、尿,、細胞培養(yǎng)上清液檢測試劑盒,;3)流式細胞儀用試劑類,包括CD系列,、細胞因子系列等,;4)乳膠手工及上機試劑,包括透光比濁檢測試劑,;5)內(nèi)分泌檢測試劑盒,包括微色譜柱類檢測試劑,;6)腫瘤標記物檢測試劑,;7)微生物傳染病檢測試劑,包括性病類及其它傳染病類檢測試劑,;8)實驗室儀器類,,包括BTS-330大屏幕半自動生化分析儀、MiniNeph微量蛋白散色比濁儀及相關(guān)試劑,;9)pcr及相關(guān)試劑,;10)肝纖維化檢測;(11)單克隆抗體,;(12)ELISPOT:細胞因子的全新解決方案,;(13)特種蛋白;14)微色譜柱,;(15)優(yōu)生優(yōu)育TORCH,;16)生化試劑;17)抗體,;18)細胞株,;19)其它分子生物學研究用試劑。
標本的采集及保存:
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,,取上清即可檢測,,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融,。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,,但應避免反復凍融,。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,,但應避免反復凍融,。
樣本處理及要求:
1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。
仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心,。
2、血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心。
3,、尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
5,、組織標本:切割標本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6,、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融.
7、不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。