Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),,重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性,。在測定時,,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,,也可用于測定抗體,。
大鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒操作步驟:
1,、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
2,、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3,、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5,、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6,、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7,、溫育:操作同3,。
8、洗滌:操作同5,。
9,、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘。
10、終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11、測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。