詳細介紹
實驗原理:
本試劑盒采用競爭elisa方法,,在微孔板包被有右旋糖酐偶聯(lián)抗原,加入右旋糖酐標(biāo)準品或樣品,,游離右旋糖酐與微孔條上預(yù)包被的右旋糖酐偶聯(lián)抗原互相競爭抗右旋糖酐抗體酶標(biāo)記物,,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進行檢測,,吸光值與樣品中右旋糖酐含量成反比,通過標(biāo)準曲線計算樣品中右旋糖酐的含量,。
技術(shù)交流:
樣品收集,、處理及保存 | 操作步驟 |
1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,,以1000×g離心15分鐘,,收集上清,。 2. 細胞:用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104 -106/ml 左右,,通過反復(fù)凍融,,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,,離心取上清液檢測,。 3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,,以1000×g離心15分鐘,,取上清待測。 4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合后靜置10-20 分鐘后,,以1000×g離心15分鐘,收集上 清,。 5. 體液:包括胸腹水,、腦脊液,分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,,以1000×g離心15分鐘,收集上清,。 6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,,用手工或勻漿器,,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,,收集上清進行檢測,。 7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。 8. 保存:如果樣品不能立即檢測,,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。 | 1.標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。 2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。 3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。 5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。 6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。 7.溫育:操作同3。 8.洗滌:操作同5,。 9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘,。 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。 11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。 |
客戶須知:
1,、液體類標(biāo)本(細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿,、血清,、血漿,、尿液、胸水,、腹水,、腦脊液等)。
2,、樣本保存:請盡早檢測,,2-8℃保存一天;需更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,。如需周期收集樣本,,請將樣本及時分裝標(biāo)號后,置-20℃或-70℃保存,;
3,、請?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬、樣本數(shù)量,、待測指標(biāo)及其他特殊要求,。
承諾:
1.有質(zhì)量問題免費包換,合同上注明了的.(質(zhì)量問題包括運輸不當(dāng),,客戶在使用過程中測不出結(jié)果,,等等!)
2.全程技術(shù)指導(dǎo),。(包括售前的標(biāo)本收集,,使用過程中不明白的地方,實驗結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,,有任何疑問,,我們技術(shù)都會即時給你去電)
3.提供免費代測的服務(wù)。(你只需把標(biāo)本寄過來,,我們?yōu)槟愎?jié)省時間,,幫你出結(jié)果,原始數(shù)據(jù),,分析數(shù)據(jù)均可提供,,一般時間是5天左右)
4.客戶有任何問題,我們都是在一個工作日之內(nèi)給出解決方案,。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠為客戶服務(wù),。