詳細(xì)介紹
上海撫生實業(yè)有限公司承諾:
1,、有質(zhì)量問題免費(fèi)包換,,合同上注明了的、(質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),,客戶在使用過程中測不出結(jié)果,,等等!)
2,、全程技術(shù)指導(dǎo),。(包括售前的標(biāo)本收集,使用過程中不明白的地方,,實驗結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,,有任何疑問,我們技術(shù)都會即時給你去電)
3,、提供免費(fèi)代測的服務(wù),。(你只需把標(biāo)本寄過來,我們?yōu)槟愎?jié)省時間,,幫你出結(jié)果,,原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù)均可提供,,一般時間是5天左右)
4,、客戶有任何問題,我們都是在一個工作日之內(nèi)給出解決方案,。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠為客戶服務(wù),。:
樣品收集、處理及保存:
1,、細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無菌管收集細(xì)胞上清液,,以1000×g離心15分鐘,收集上清,。
2,、細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104
-106/ml左右,,通過反復(fù)凍融,,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,,離心取上清液檢測,。
3、血清:在室溫下,,血液自然凝固,,以1000×g離心15分鐘,取上清待測,。
4,、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20分鐘后,,以1000×g離心15分鐘,,收集上清。
5,、體液:包括胸腹水,、腦脊液,分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,,以1000×g離心15分鐘,收集上清,。
6,、組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0,、5mg,,加入500ul的PBS,用手工或勻漿器,,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,,以2000-3000
rmp離心20分鐘,收集上清進(jìn)行檢測,。
7,、樣品中不能含有NaN3,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
8,、保存:如果樣品不能立即檢測,,應(yīng)將其分裝,-70℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟:
1,、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2,、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3,、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5,、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6,、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7、溫育:操作同3,。
8,、洗滌:操作同5。
9,、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘,。
10、終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11、測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
大鼠ELISA試劑盒的組成: