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1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104
-106/ml 左右,，通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè),。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測(cè),。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上
清。
5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。
7. 樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘,。
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。