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1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份,。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
           2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104
           -106/ml 左右,，通過反復凍融,，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測,。
           3. 血清：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測。
           4. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上
           清,。
           5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
           6. 組織標本：切取組織標本,，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000
           rmp離心20 分鐘,，收集上清進行檢測,。
           7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
           8. 保存：如果樣品不能立即檢測,，應將其分裝，-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
           2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
           3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
           4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
           5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干,。
           6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
           7.溫育：操作同3,。
           8.洗滌：操作同5。
           9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘,。
           10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
           11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。