高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：豬肝星狀細(xì)胞（永生化）　環(huán)指蛋白128封閉多肽　放線共生放線桿菌PCR檢測(cè)試劑盒　大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 ELISA　Ca++Mg++ ——ATP酶酶活性比色法檢測(cè)試劑盒　德巴利腐霉　大腦發(fā)育同源蛋白2抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷,！

保存條件：收到本產(chǎn)品后按照上面指示溫度存放各成分，儲(chǔ)存18個(gè)月不影響使用效果,。

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用改進(jìn)SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞,，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除,，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好,?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯,、氯仿等試劑,，從100-200ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中，可快速提取0.2-0.5mg純凈的高拷貝質(zhì)粒DNA,，提取率達(dá)80 %左右,。

3.獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、超螺旋比例高,、純度好,，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化,、PCR,、體外轉(zhuǎn)錄、測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備,？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞、組織,、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛,，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組,、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸,。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個(gè)循環(huán)之前，通常加熱長一些時(shí)間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在,。該步驟時(shí)間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段,。

二,、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃,。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘,。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長,，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3,、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間,。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí)，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時(shí)間,，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時(shí)間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,，延伸時(shí)間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴(kuò)增增加,。

公司正在出售的產(chǎn)品：