廣譜植物基因組 DNA 快速提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：人腺癌細胞系　Alexa Fluor 488標記鏈霉親和　邊緣無漿體PCR檢測試劑盒　大鼠巨噬細胞炎癥蛋白5(MIP-5)ELISA檢測試劑盒　N乙酰βD葡萄糖苷（NAG）活性比色法檢測試劑盒　草色串孢　鴨沙門氏菌抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷,！

保存條件：本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果,。

產(chǎn)品介紹：

        該試劑盒采用DNA吸附柱和新型的溶液系統(tǒng),，適合于從植物樣品中快速簡單地提取基因組DNA。新鮮或干燥的植物組織（細胞）磨碎后經(jīng)裂解液裂解；蛋白質(zhì),、多糖,、細胞殘片被沉淀去除；然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 進一步將多糖,，多酚和細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點：

1.重復性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小,?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

 2.簡單快速,單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成,。

3.多次柱漂洗確保高純度,，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9,可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應,。

自備試劑：無水乙醇

PCR 反應需要使用哪些試劑和設備,？

試劑:
模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞,、組織,、血液中提取DNA等；引物：PCR反應的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等，用于擴增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用,，調(diào)節(jié)反應pH,，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,，可增強PCR反應特異性,，從而提高反應效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組,、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,，用來判別DNA片段大小的工具,。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產(chǎn)物；
設備：
PCR儀：用于控制反應溫度,，保證PCR反應時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制,；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸,。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術(shù)中均是,，只有在有序齊全的基礎上，才能進行PCR反應并得出準確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎實驗：

PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環(huán)組成,，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在,。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段,。

二,、退火或稱接合,復性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃,。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘,。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2、復性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結(jié)合,。復性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高。復性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設定。

3,、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間,。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間,。這里需要注意,，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間,。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應的產(chǎn)率不可能達到100%,，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴增增加,。

公司正在出售的產(chǎn)品：