RNase Away 即用型強力 RNase 滅活劑公司正在出售的產(chǎn)品：人真皮成纖維細胞（永生化）　鋅指蛋白263封閉多肽　蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒　大鼠角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA檢測試劑盒　ATP含量酶活性比色法檢測試劑盒　糾纏青霉　卷曲螺旋結構域蛋白38抗體

商品屬性：

保存條件：室溫 6 個月,。

產(chǎn)品介紹：

RNaseAway 主要用來清除實驗器具表面 RNA 酶,。它含有數(shù)種抑制 RNA 酶成份，可以有效的清除包括操作臺,，玻璃表面,，塑料表面等處的 RNA 酶污染。

注意事項：

1. RNaseAway 環(huán)境溫度低時可能會析出渾濁或者沉淀,，可在 37℃水浴加熱幾分鐘,，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃,，以免形成過量的泡沫,。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、PH 值變化影響使用效果,，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子,。

3. RNaseAway 有腐蝕性，操作時候應該戴手套,，并且避免用于某些易腐蝕的金屬表面。

操作步驟：

1.塑料和玻璃容器加入足夠 RNaseAway 到容器中,，使所有的待處理容器表面都充分接觸到 RNaseAway（可以傾斜,，顛倒或者抓著容器打旋轉來幫助待處理表面都接觸到 RNaseAway，如果是離心管,，可以渦旋振蕩 1min）,，10min 后，棄RNaseAway,，用高壓滅菌水/DEPC 處理水充分淋洗后晾干（注意避免使用 RNase 污染的水淋洗或者操作不慎引

入二次污染）,。

2.工作臺面

直接將 RNaseAway 噴灑在工作臺面并用紙巾擦拭均勻，10min 后用干凈紙巾擦去表面 RNaseAway,，然后用高壓滅菌水淋洗后,，用新的干凈紙巾擦干。

3.實驗設備

將 RNaseAway 小心倒在紙巾上,，用潤濕了 RNaseAway 的紙巾擦洗實驗設備表面（小的實驗設備部件可以短暫浸泡在 RNaseAway）,，10 min 后用干凈紙巾擦去表面 RNaseAway，然后用高壓滅菌水淋洗后,，自然風干或者用新的干凈紙巾擦干,。

PCR基本步驟及注意事項？

一,、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,，它類似于生物體內(nèi)DNA的復制。在生物體內(nèi)DNA復制需要模板,、引物,、DNA聚合酶、DNA解旋酶,、 dNTPs,；而體外PCR反應同樣需要類似的成分，有模板,、引物,、PCR Buffer、Taq酶,、dNTPs,。其中引物是人工設計的特定序列，實現(xiàn)對特定位置的擴增,；PCR Buffer提供一個反應的緩沖環(huán)境,；反應過程同生物體內(nèi)一樣,，DNA雙鏈打開，引物結合模板,，延伸形成新鏈,。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈，而在體外在通過控制反應溫度實現(xiàn)的,。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,，在退火溫度處引物結合到模板上，最后在72℃完成延伸,，并反復重復此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增,。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子，進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍,。

在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應,。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增，達到較高水平,。因此,，應適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù)，在平臺期前結束反應,， 減少非特異性產(chǎn)物,。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二,、主要的成分

1.模板可以是多種形式,，主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA,、攜帶病毒的基因組DNA,、PCR產(chǎn)物，cDNA等,，但不能為RNA,。對于不同類型的模板，其主要不同在于預變性的時間以及模板的量,。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,，質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min,、PCR產(chǎn)物預變性2min即可,。

注意cDNA為單鏈DNA，但仍可做PCR的模板,，只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結合,，合成另一條鏈。從第二輪開始,，兩個引物均與特異位點結合,，從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌,。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增，原因就在于實現(xiàn)PCR反應的是DNA聚合酶,，只能特意識別DNA鏈,。

2.對于模版的量來說，一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng,。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,，提取的濃度也往往比較大，為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,，故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增,。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結構簡單,，且提取濃度一般較低，則無需稀釋,。

PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

沒有ct值

檢測結果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1,、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤,。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3,、引物或探針降解?？赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4,、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增),。

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確,。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設計和目的進行。

1,、擴增效率低,。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3,、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等,。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長,。PCR產(chǎn)物設計超過500bp;

5,、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋,。

公司正在出售的產(chǎn)品：