2×Taq Plus PCR MasterMix( 含綠染料）公司正在出售的產(chǎn)品：人侵襲性脈絡(luò)膜黑色瘤細胞　促性腺激調(diào)節(jié)睪丸RNA解旋封閉多肽　禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒　大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA Kit　丙酮脫氫（PDH)活性比色法檢測試劑盒　嗜松青霉　PCID1蛋白抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷,！

儲存條件：-20℃ 保存,。

制品說明：

本產(chǎn)品包含Taq Plus DNA聚合酶,、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液，濃度為2×,。具有快速簡便,、靈敏度高,、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,，可最大限度的減少人為誤差,。使用時只需加入DNA模板和引物既可。

本產(chǎn)品使用方便快捷,，能避免 PCR 操作過程中的污染,，使用時只需取適量2×Taq PCR MasterMix溶液，加入模板和引物,，并加入去離子水補足體積,，使MasterMix溶液濃度為1×即可進行反應(yīng)。使用前請保證充分溶解并混勻,，操作需在冰上進行,。

本產(chǎn)品有含染料和不含染料兩種。含染料產(chǎn)品中有兩種染料|（綠色染料和黃色染料）,，在電泳時會分開以監(jiān)測遷移進度,。青色的染料在1%的瓊脂糖凝膠中與3-5kb DNA片段的遷移率相同。黃色的染料在1%的瓊脂糖凝膠中比引物遷移得快（＜50bp）,。

產(chǎn)品內(nèi)容：0.05units/μl Taq Plus DNA Polymerase ,、4mM MgCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)

質(zhì)量控制：經(jīng)檢測無外源核酸酶活性,；PCR方法檢測無宿主殘余 DNA ,；能有效地擴增人基因中的單拷貝基因；室溫存放一周,，無明顯活性改變,。

適用范圍：

基因檢測：本產(chǎn)品不同批次之間誤差很小，特別適合大規(guī)?；驒z測,，半定量PCR實驗和微量DNA的檢測。

DNA擴增和一些有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板和GC含量高（>60%）,，有二級結(jié)構(gòu)等的擴增：DNA片段的PCR擴增,、DNA標記,、引物延伸,、序列測定等。PCR產(chǎn)物帶A,，純化后可直接用TA克隆,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細胞,、組織,、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等，用于擴增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機化合物如甲醛,，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組,、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作,。MARK:一種分子量標準,，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸,。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在,。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段,。

二,、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃,。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘,。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3,、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間,。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時間,，可根據(jù)待擴增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間,。這里需要注意,，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間,。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴增增加,。

公司正在出售的產(chǎn)品：