無乳鏈球菌(StA)檢測試劑盒(熒光-PCR法)的相關產(chǎn)品:ADAM2 去整合素樣金屬蛋白酶2抗體 0.2mlAD7C-NTP 神經(jīng)絲蛋白抗體 0.2ml
DMBT1 抑基因抗體 規(guī)格: 0.1mlFLASH/CASP8AP2 半胱氨酸蛋白酶8相關蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
PRAS40/AKT1 substrate 1 蛋白激酶AKT底物1抗體 規(guī)格: 0.2mlTSPAN5 四

使用方法:

一,、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。

5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。

三,、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標準曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復,，則標記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照,。

操作流程:

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！

 

 

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應,，無非特異性擴增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝,；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,，可同時進行多個檢測,；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結果,。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,，得到的Ct值是恒定的,。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法,，已得到的*,，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領域。

定量PCR方法：

a,、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）,。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。

b,、內參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記,。在模板擴增的同時，內標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度,，以內標為對照定量待檢測

3371-27-5沒食子兒茶 規(guī)格： 20mg

34168-56-4梓;Catalpol 規(guī)格： 20mg

56-87-1賴氨 規(guī)格： 20mg

草烏 規(guī)格： 0.6g

尿囊 規(guī)格： HPLC≥98%,100mg/支

40957-83-3黃豆黃 規(guī)格： 20mg

瑞芬太 規(guī)格： 20mg

71294-60-5羅希吐 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

1034-01-1沒食子辛酯 規(guī)格： 20mg

82854-37-3松果菊; 膽 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

無乳鏈球菌(StA)檢測試劑盒(熒光-PCR法)ASH1L  ASH1抗體 規(guī)格: 0.2ml

DECTIN 2  C型凝集結構域家族6成員A抗體 規(guī)格: 0.1ml

LRRC10  富含亮氨重復10抗體 規(guī)格: 0.2mlDnmt3a  DNA甲基轉移-3α抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Mink IgG/Bio  標記的兔抗貂IgG 規(guī)格: 0.1ml

Mtp53(N235K N239Y)  突變型P53抗體 規(guī)格: 0.1mlSCD1  固酰脫1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CBLL1/Ecadherin binding protein E7  上皮鈣粘附分子結合E7 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-human IgG/Cy5  Cy5標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Cripto-1(NT)  畸胎瘤衍化生因子抗體(N端) 規(guī)格: 0.2ml

PDI/P4HB/ERBA2L/PDIA3  質二硫鍵異構抗體 規(guī)格: 0.1mlPCDHA2  原鈣粘附α2抗體 規(guī)格: 0.2ml

MYOZ/MYOZ1  MYOZ抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC104  卷曲螺旋結構域104抗體 規(guī)格: 0.2mlAconitase 1/IRP-1  鐵調節(jié)1抗體 規(guī)格: 0.2ml