異尖線蟲(Ani)檢測試劑盒(熒光-PCR法)的相關(guān)產(chǎn)品:Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CTNNA1 (Ser641) 磷酸化α-連環(huán)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-STAT6(Tyr641) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Listeria tropi

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！

 

 

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng),，無非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝,；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,，可同時進(jìn)行多個檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒,。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的,。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性定量方法,，已得到的*,，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

定量PCR方法：

a,、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）,。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。

b,、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時,，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測

細(xì)胞組織型纖維蛋白溶酶原激活劑（tPA）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒  20次

組織樣品組織型纖維蛋白溶酶原激活劑（tPA）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒  20次

血液組織纖維型蛋白溶酶原激活劑（tPA）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒  20次

細(xì)胞型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

組織型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

血液型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

細(xì)胞型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性熒光定量檢測試劑盒  20次

組織型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性熒光定量檢測試劑盒  20次

血液型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA）活性熒光定量檢測試劑盒  20次

7（FACTOR VII）活性比色法定量檢測試劑盒  20次

異尖線蟲(Ani)檢測試劑盒(熒光-PCR法)CDKN2A/P16  抑基因p16抗體 規(guī)格: 0.1ml

RPS6  S6核糖體抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-GSK-3 Beta(Ser9)  磷化合成激3β抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PI3K p85/PIK3R1(Tyr368)  磷化磷脂酰肌激抗體 規(guī)格: 0.1mlIGSF16/CD300C  免疫球超家族成員16抗體 規(guī)格: 0.2ml

P2RX3/ATP receptor  受體P2X3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Endostatin/COL18A1  內(nèi)皮抑/內(nèi)皮他丁抗體 規(guī)格: 0.1mlBMPR1B  骨形態(tài)發(fā)生受體1B抗體 規(guī)格: 0.1ml

FOXA2/HNF 3beta  肝細(xì)胞核因子3抗體 規(guī)格: 0.1ml

C2ORF25  2號染色體開放閱讀框25抗體 規(guī)格: 0.2mlC1orf183  1號染色體開放閱讀框183抗體 規(guī)格: 0.2ml

FAM78A/C9orf59  9號染色體開放閱讀框抗體 規(guī)格: 0.2ml

GABARAPL1  γ氨基丁受體相關(guān)樣1抗體 規(guī)格: 0.2ml

OST-beta  有機溶質(zhì)轉(zhuǎn)運OSTβ抗體 0.2ml

使用方法:

一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。

1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭,，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。

8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照。