TRIzol Reagent公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠皮膚細(xì)胞　“冷"蛋白TRPM8封閉多肽　纖維單胞菌通用PCR檢測(cè)試劑盒　大鼠絨毛膜促性腺激β(β-CG)ELISA試劑盒　莽草脫氫（SD）活性比色法檢測(cè)試劑盒　喜鹽芽胞桿菌　心肌病相關(guān)蛋白2抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷,！

是一種可提取動(dòng)植物樣品中RNA 的制品,。樣品在 TRIzol Reagent 中能夠充分被裂解，在樣品勻漿或裂解過(guò)程中,，它可保持 RNA 的完整性，同時(shí)裂解細(xì)胞,，溶解細(xì)胞內(nèi)含物。TRIzol Reagent 具有很強(qiáng)的廣譜性,，可以適用于各種樣品的總 RNA 提取，提取過(guò)程方便快速,，整個(gè)操作在一小時(shí)內(nèi)便可以完成,。該試劑可用于小量樣品（50-100 mg 組織,、1x106 細(xì)胞）也適用于大量樣品（≥1g組織、>107 細(xì)胞）,。對(duì)人,、動(dòng)物、植物組織,、細(xì)菌均適用,，可同時(shí)處理大量不同樣品,，整個(gè)提取過(guò)程在一小時(shí)內(nèi)即可完成。分離的總RNA蛋白質(zhì)和 DNA污染極低,，可用于NorthernBlot,、反轉(zhuǎn)錄、ployA 篩選,、體外翻譯,、RNase 保護(hù)分析和基因克隆,。
儲(chǔ)存：2-8℃避光保存，可保存 2 年,。
注意：該試劑含有強(qiáng)變性劑，請(qǐng)勿直接于皮膚接觸或吞咽,，若接觸到皮膚或眼睛請(qǐng)盡快到醫(yī)院處理,。實(shí)驗(yàn)時(shí)務(wù)必穿實(shí)驗(yàn)服,，戴手套。
操作方法
自備試劑：氯仿,，異丙醇,，70％乙醇（DEPC 水配置）,，RnaseFree H2O。
Ⅰ 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：RNA 制備的關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及試劑中的 RNA 分解酶的污染,。因此,，在實(shí)驗(yàn)中必須采取以下措施：戴一次性干凈手套,；使用 RNA 操作專用實(shí)驗(yàn)臺(tái),；在操作過(guò)程中避免講話等等,。通過(guò)以上辦法可以防止實(shí)驗(yàn)者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染,。
注意事項(xiàng)：
1. 盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿,，應(yīng)在使用前用0.1%DEPC 水溶液在 37℃處理 12h,，然后在 120℃高壓滅30min 以除去殘留的 DEPC,。
2. 用于 RNA 實(shí)驗(yàn)的試劑，須使用干熱滅菌（180℃,，60min）或使用上述方法進(jìn)行 DEPC 水處理滅菌后的玻璃容器盛裝（也可以使用 RNA 實(shí)驗(yàn)用的一次性塑料容器)，使用的無(wú)菌水須用 0.1%的 DEPC處理后再進(jìn)行高溫高壓滅菌,。
3. RNA 實(shí)驗(yàn)用的試劑和無(wú)菌水都應(yīng)專用,，避免混用后交叉污染,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備,？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,，通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在,。該步驟時(shí)間1-2分鐘,，接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段,。

二、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合,。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度,。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr（來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1,、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,，再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2,、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。

3,、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),，過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,，延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間,。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：