10min病毒DNA/RNA提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：猴腎細(xì)胞系　ADP核糖基化因子1封閉多肽　綿羊夏伯特線蟲PCR檢測(cè)試劑盒　大鼠乳脫氫(LDH)試劑盒 ELISA　糜蛋白活性比色法檢測(cè)試劑盒/胰凝乳蛋白活性比色法檢測(cè)試劑盒　耳炎假單胞菌　14號(hào)染色體開放閱讀框106抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

該取試劑盒采用裂解液,，可快速可靠的從糞便、淋巴液,、血清,、血漿樣本中純化出高純度的病毒 DNA/RNA。應(yīng)用本試劑盒提取的 DNA/RNA 可直接用于反轉(zhuǎn)錄,、One-Step RT-PCR,、文庫(kù)構(gòu)建等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
（1） 首本試劑盒中的 Washing Buffer 中已經(jīng)加乙醇,，無(wú)需單獨(dú)添加,。
（2）Virus DNA/RNA LB1，儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)有白色結(jié)晶沉淀,，放置于 56℃水浴鍋溶解后,，不影響使用效果。
（3）蛋白酶 K（20 mg/ml）長(zhǎng)期保存請(qǐng)儲(chǔ)存于-20℃,，短期室溫保存（6 個(gè)月）,，其它組分儲(chǔ)存于室溫。
（4）該試劑盒的保質(zhì)期為 2 年,。
操作方法
（1）在 1.5mL 離心管（自備）中加入 200μL 病毒液 （糞便提取液,、血清、血漿等）,，加入 50μL Virus DNA/RNA LB1和 20μL 蛋白酶 K,，漩渦混合均勻，室溫消化 5min,。
（2）消化完畢后,，向上述樣本中加入 700μL Virus DNA/RNABB2，漩渦混合 1min,。
（3）將上述混合液全部倒入到吸附柱中,，13000rpm 離心1min。
（5）倒掉廢液,。向吸附柱中加入 500μL Washing Buffer,，13000rpm 離心 15s。重復(fù)此步驟。
（6）將吸附柱重新放回離心機(jī),，13000rpm 空離心 1min,，將殘留的乙醇甩干。
（7）將吸附柱芯放入到 1.5mLRnase Free 收集管中,，向吸附柱芯中加入 30~80μLNucleaseFree,，13,000rpm 離心1min，洗脫液即為 DNA/RNA 產(chǎn)物,，冷凍保存,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸,。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個(gè)循環(huán)之前,，通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在,。該步驟時(shí)間1-2分鐘,，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二,、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃,。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合,。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度,。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min,、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1,、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,，再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈,。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長(zhǎng)，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2,、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。

3,、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間,。這里需要注意，延伸時(shí)間過長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間,。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：