DNA氣溶膠污染去除劑公司正在出售的產(chǎn)品：倉鼠肺細(xì)胞　軸突導(dǎo)向因子SEMA6D封閉多肽　羊痘病毒PCR檢測試劑盒　大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA檢測試劑盒　硫氧還蛋白氧化還原（TrxR）活性比色法檢測試劑盒　居藻芽孢桿菌　脂多糖相關(guān)反應(yīng)蛋白5/γ-taxilin抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷！

描述：氣溶膠是懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為 1 nm ~ 1 mm 的固體,、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)散體系,，其分 散并懸浮在氣體介質(zhì)中的核酸聚合物，廣泛存在于實(shí)驗(yàn)室 桌面,、儀器,、耗材以及空氣中。 DNA 氣溶膠與核酸擴(kuò)增過程（PCR,、LAMP 等）相 伴相生,。空氣與液體面摩擦,、離心機(jī)離心,、劇烈地?fù)u動反 應(yīng)管、PCR 開蓋、移液器的反復(fù)吸樣,、污染物的外泄等 途徑,，都會產(chǎn)生 DNA 氣溶膠。分子實(shí)驗(yàn)室作為科研和臨 床檢驗(yàn)場所,，PCR（或 LAMP）的使用頻率較高,，且樣本 和擴(kuò)增目標(biāo)經(jīng)常出現(xiàn)多批次相同的情況，DNA 氣溶膠污 染在實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)不斷累積,，污染風(fēng)險不斷增加,，假陽性的 發(fā)生頻率也越來越高。PCR 等技術(shù)的高擴(kuò)增效率,，產(chǎn)生 的核酸氣溶膠污染,，會導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性。假陽性意 味著實(shí)驗(yàn)不可信,，并且直接造成實(shí)驗(yàn)室經(jīng)濟(jì)損失,。更嚴(yán)重 的是，如果形成氣溶膠污染,，則可引起整個 PCR 實(shí)驗(yàn)室 的污染,，甚至要關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室。 由于 DNA 高耐熱性,、高吸附能力,、對有機(jī)溶劑的高 耐受性特點(diǎn)，無論采用高壓滅菌,、清水沖洗,、酒精擦洗均 不能去除 DNA 污染。 全新開發(fā)的強(qiáng)力核酸 酶（DNA Cleaning 酶）,，可在室溫 15min 內(nèi)將 DNA 污染物降解為 2-6 bp 的寡核苷酸,，無論是移液器、PCR 儀,、耗材,、實(shí)驗(yàn)室桌面上的 DNA 吸附污染物均被酶解。 DNA 被酶解后,，DNA Cleaning 酶可在 60℃烘干 10min 或者 70%酒精擦拭后不可逆失活,，從而避免后續(xù)對實(shí)驗(yàn) 的影響。該制品不含任何有機(jī)毒性溶劑,，無毒,、無腐蝕性， 不對設(shè)備造成任何損傷,。

 儲存： -20℃可保存 3 年。 

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具,。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制,；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段,。

二、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合,。該步驟時間1-2分鐘,。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min,、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1,、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈,。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2,、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。

3,、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間,。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間,。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：