Bsu DNA聚合酶 大片段公司正在出售的產(chǎn)品：JC53BL(也稱為TZM-BL)　3號染色體開放閱讀框25封閉多肽　大腸彎曲桿菌PCR檢測試劑盒　大鼠醛固酮(ALD)ELISA Kit　磷烯醇式丙酮羧化（PEPC）活性比色法檢測試劑盒　產(chǎn)玉米副球菌　唾液結(jié)合免疫球蛋白樣凝集9抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷！

Bsu DNA 聚合酶,，來源于 嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus subtilis），系將 Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前 296 個(gè) AA 截去而得,。該酶保留了Bsu I 的 5′-3′聚合酶活性,，但是缺失了 5′-3′ 核酸外切酶結(jié)構(gòu)域，該大片段自身缺失 3′-5′ 核酸外切酶活性,，可用于重組酶擴(kuò)增,。

應(yīng)用： 隨機(jī)引物法標(biāo)記
cDNA 第二條鏈的合成
單個(gè) dA 的加尾
鏈置換的 DNA 合成
熱失活：75°C，20min,。
活性定義：在 37℃條件下,，30min 內(nèi)參入 10nmol 酸性不容物定義為 1 Unit。
1X Bsu Reaction Buffer: 50 mM NaCl ,，10 mM Tris-HCl(Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT
酶儲存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mMDTT, 37.5% Glycerol.
儲存：置于-20°C 可保存 2 年,，避免反復(fù)凍融。
注意：(1) 由于缺乏 3 ′-5 ′核酸外切酶活性,，Bsu DNA 聚合酶不能切除 3′未配對的突出末端，因而不適用于生成平齊末端,。
(2) 25℃ 時(shí) Bsu DNA 聚合酶保留 50% 的活性,，是同溫度下 Klenow 片段（3′-5′ exo-）的兩倍,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具,。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制,；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,，通常加熱長一些時(shí)間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段,。

二、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合,。該步驟時(shí)間1-2分鐘,。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min,、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1,、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈,。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2,、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。

3,、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時(shí)間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間,。這里需要注意，延伸時(shí)間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間,。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：