化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷,！
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-PJ1061 | 5×Q-Solution | 1ml |
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸,。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：
一,、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。
二,、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃,。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合,。該步驟時間1-2分鐘。
三,、延伸：
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min,、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1,、變性溫度和時間：
保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈,。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。
2,、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。
3,、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間,。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間,。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
神經(jīng)肉孢子蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 | 胞漿免疫球蛋白ELISA試劑盒 CIg免費(fèi)代測試劑 | 睡眠嗜血桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 |
傳染性膿皰皮炎病毒PCR檢測試劑盒價格 | 單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞分化關(guān)聯(lián)蛋白ELISA試劑盒 MMA免費(fèi)代測試劑 | 青蟹雙順反子病毒PCR檢測試劑盒直銷 |
鼻疽伯克霍爾德菌(BM)核檢測試劑盒 | 細(xì)胞周期IELISA試劑盒 | 馬生殖泰勒氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
呼吸道合胞病毒A組PCR檢測試劑盒 | 彈性蛋白微原纖維界面因子1ELISA試劑盒 | 馬胃葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 |
馬秋博病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 低氧誘導(dǎo)因子2ELISA試劑盒 | 索氏梭狀桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
侵入性絲囊霉菌（潰瘍綜合癥病原）染料法熒光定量PCR試劑盒 | 丁型肝炎病毒抗體ELISA試劑盒 | 犬細(xì)小病毒(CPV)核檢測試劑盒 |
禽阿爾法皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 多巴胺受體D5ELISA試劑盒 | 芡實(shí)探針法PCR鑒定試劑盒 |
馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 多萜醇磷-N-乙酰氨基葡萄糖磷轉(zhuǎn)移1 ELISA試劑盒 | 鏈球菌屬通用PCR試劑盒 |
馬毛癬菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 二氫葉還原ELISA試劑盒 | 牛腺病毒（4-8型）通用PCR試劑盒 |
槍狀肝吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 防御β112ELISA試劑盒 | 馬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 |
蓮子染料法PCR鑒定試劑盒 | 人動力蛋白輕鏈1,細(xì)胞質(zhì)(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)ELISA檢測試劑盒 | 氣單胞菌通用PCR檢測試劑盒 |
牛眼莫拉氏菌PCR檢測試劑盒供應(yīng) | 人孤腓肽(OFQ/N)試劑盒elisa | 腸賈第蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 |
陰溝腸桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 5×Q-Solution人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)ELISA試劑盒 | 同豬皰疹病毒型偽狂犬病病毒PCR檢測試劑盒 |
綿羊莫拉菌PCR檢測試劑盒 | 人β,β胡蘿卜9',10'加氧(BCO2)試劑盒ELISA | 人膚蠅探針法熒光定量PCR試劑盒 |
鯉春病毒(SVCV)核檢測試劑盒 | 人成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)檢測試劑盒elisa | 槍狀肝吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)