Strep-Tactin XT Resin公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞　鐵調(diào)節(jié)蛋白1封閉多肽　傳染性膿皰皮炎病毒PCR檢測試劑盒　大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 ELISA　雙縮脲法蛋白含量活性比色法檢測試劑盒　纏繞鏈霉菌　9號染色體開放閱讀框153抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

Strep-Tactin XT（Strep-Tactin 的升級產(chǎn)品）瓊脂糖凝膠 FF 是一種將 Strep-Tactin XT 共價交聯(lián)在瓊脂糖凝膠微球上,，形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該純化介質(zhì)主要用于純化 Strep tag II 或 Twin strep tag 標(biāo)簽蛋白,。Strep tagII 標(biāo)簽為 8 個氨基酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK）,，由于標(biāo)簽小，僅為 1kDa 左右,，一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能,，常用于融合表達蛋白質(zhì)的檢測和純化,。由于 Strep-Tacin XT 對 Strep tag II 標(biāo)簽具有高度特異性，一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品,。Strep tag II 標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物su競爭方式進行洗脫,，該洗脫方式比較溫和，對蛋白影響極小,。由于 Strep-Tactin 對 Strep tag II 標(biāo)簽具有很強的吸附能力,，在生物su的洗脫過程中不易洗脫，造成洗脫效率較低,?？梢酝ㄟ^在脫硫生物su洗脫液中添加 25mM NaOH 來提高蛋白回收效率，而添加 NaOH 后會造成 Strep-Tactin從填料上脫落,，進而污染純化蛋白,。本產(chǎn)品為升級的 Strep-Tactin XT，其可耐受高濃度的 NaOH 洗脫（0.5M）,，除此外 Strep-Tactin XT 可耐受 1%SDS,、6M 尿素，因此使用該填料可以在變性條件下純化標(biāo)簽蛋白,。

儲存：4~8℃可保存 2 年,。
保存液：10mM Tris-HCl，pH7.5,；100mM NaCl,；20%乙醇
實驗用溶液：
(1) 結(jié)合緩沖液：根據(jù)自身蛋白性質(zhì)來定，一般推薦 50mM Tris-HCl(pH8.0), 150mM NaCl（或采用 PBS）
(2) 洗滌液與結(jié)合緩沖液相同,，一般洗滌 5~20 個柱體積。
(3) 洗脫緩沖液：在結(jié)合緩沖液中加入 2.5~3.5mM D-Biotin,?；蚋鶕?jù)蛋白性質(zhì)和用途靈活使用其它洗脫條件，如 2.5mMD-Biotin+10mM NaOH,；25~50mM NaOH,；0.2% SDS：
(4) 柱再生：0.2M NaOH 洗滌 3~5 個柱體積；1M NaCl 洗滌 3~5 個柱體積,；PBS 平衡 3~5 個柱體積,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細胞,、組織、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等，用于擴增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機化合物如甲醛,，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組,、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸,。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在,。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段,。

二,、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃,。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘,。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3,、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,，可根據(jù)待擴增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間,。這里需要注意,，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間,。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴增增加,。

公司正在出售的產(chǎn)品：