2min DNA/RNA直提試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：人腎透明細胞腺癌細胞-紅色+熒光標(biāo)記　甘肽過氧化物8封閉多肽　流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒　大鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒　土壤中性磷(SNP)活性比色法檢測試劑盒　涅氏小短桿菌　DNA結(jié)合蛋白C抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用,、不得用于臨床診斷,！

本試劑適合從各種組織,、體液中快速提取制備 PCR檢測級別的基因組 DNA 和 RNA。制備的 DNA 和 RNA 可直接應(yīng)用于 TaqMan PCR,、One-Step PCR,、LAMP、RPA 的擴增實驗,。該試劑制備 DNA/RNA 樣品操作及其簡單,，通常2min 內(nèi)可完成制備,。

儲存: 室溫保存 6 個月，若長期保存請置于-20℃（5 年）,。
適用組織類型
從感染病毒的組織樣本中提取病毒 DNA/RNA,。
從感染細菌的組織樣本中提取細菌 DNA。
從動物口腔唾液拭孖中提取病毒 DNA/RNA,。
從植物組織中提取 DNA/RNA,。
從血漿、血清中提取病毒 DNA/RNA
操作方法
1. 動物,、植物組織中提取病毒 DNA/RNA將組織樣本約 1~10 mg 放入到 1.5mL EP 管中,，并加入500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，加入幾粒鋼珠,，置于組織研磨儀中研磨 1min 左右,。研磨完畢后加入 100 μl 的DNA/RNA DirOut-B 溶液，漩渦混合均勻（可短離心將未磨碎的組織去除）,，取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板,，直接用于下游 PCR 等試驗即可。注意：組織使用量不要超過 50mg,，過多的組織量會抑制后續(xù) PCR 反應(yīng),。
2. 從血清、血漿,、唾液等體液中提取病毒 DNA/RNA在 1.5mL EP 管中加入 100 μl 血清,、血漿、唾液等液體樣本,，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A,，漩渦混合30s。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液,，漩渦混合均勻,，取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等試驗即可,。
3. 從動物咀嚼過的沙包或拭孖中提取病毒 DNA/RNA剪切部分動物咀嚼過的沙包或拭孖放置到 1.5 ml EP 管中,，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，漩渦混合30s,。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液漩渦混合均勻,，取 1 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等試驗即可,。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備,？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞,、組織,、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物,，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）,、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP）,，用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增,；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU,、Phusion等，用于擴增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機化合物如甲醛,，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組,、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度,，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸,。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果,。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：

一,、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離,。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在,。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段,。

二,、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃,。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘,。

三,、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度,。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒,。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。

2、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合,。復(fù)性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3,、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間,。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定,，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

4,、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后,，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,，因此不管模板濃度是多少,，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴增增加,。

公司正在出售的產(chǎn)品：