樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g,，加入1mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于4℃，10000g 離心 5min,，取全部上清于 4℃,、100000g離心30min，棄上清,，取沉淀溶于 1mL 試劑一,。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）,；然后于4℃,，10000g 離心5min，取全部上清于4℃,、100000g 離心30min,，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一,。

3. 血清：直接測(cè)定,。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：液體 50mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑二：液體 50mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑三：液體×5 瓶，-20℃避光保存,。臨用前根據(jù)用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻,。(3天使用完)

優(yōu)點(diǎn)如下：

1、快速簡(jiǎn)便：操作時(shí)間短,，48-50T,，可測(cè)40例樣本左右，96-100T,可測(cè)80例樣本左右,；

2,、取樣量微：常規(guī)操作取樣量50l， 酶標(biāo)儀操作僅需5l即可檢測(cè),，部分試劑盒取樣多少請(qǐng)；

3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效,；

4,、再現(xiàn)性好：20倍稀釋線性仍然良好；

5,、回收試驗(yàn)： X =99%,；

6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,，重復(fù)性強(qiáng)；

7,、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血清(漿),、組織、各種體液,、灌流液,、各種培養(yǎng)細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等，部分試劑盒適用于檢測(cè)植物,。

測(cè)定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣,，不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱,。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。

3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。

4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求,。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察,，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),，即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵,。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對(duì)照顏色極淺,，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色,。

2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。

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