PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增,；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝,；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測,；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒,。

操作流程:

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果,。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到的*，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。

定量PCR方法：

a,、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b,、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記,。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標為對照定量待檢測

使用方法:

一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。

三,、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線,。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照,。

574-84-5秦皮;秦皮亭;白蠟樹內(nèi)酯 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

α- 規(guī)格： 100mg

25-甲氧基-原人參三 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

65995-63-3石榴 規(guī)格： 20mg

乳諾星 規(guī)格： 100mg;97.2%

25274-27-5馬兜鈴 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

羅漢果 規(guī)格： 2g

87-89-8肌; Isitol 規(guī)格： 20mg

8000-34-8丁香油（UV98%） 規(guī)格： 20mg

唑林 規(guī)格： 100mg

超快核酸銀染試劑盒說明書CHMP1A  染色質(zhì)修飾1A抗體 規(guī)格: 0.2ml

ZNF307  鋅指307抗體 規(guī)格: 0.2mlMammaglobin A  珠1抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PKMYT1(Thr495)  磷化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激抗體 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

DCTN1/Dynactin 1  動力激活1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Goat IgM/Gold  膠體金標記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 2ml

LZTS1  假定瘤抑制亮氨拉鏈1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Jun B  活化激B抗體 規(guī)格: 0.1mlCCDC5  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域5抗體 規(guī)格: 0.2ml

MTCP1  成熟T淋細胞增1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CNKSR2  Ras激抑制因子連接增強2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Aryl Hydrocarbon Receptor/AHR  芳香烴受體抗體 規(guī)格: 0.2ml