化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Elite樣本保存液 | 50次反應(yīng)/1ML | A-Tq3128 |
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備,？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA,，如從細(xì)胞,、組織,、血液中提取DNA等,；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物,；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）,、脫氧鳥苷酸（dGTP）,、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂,、DNA合成等生物學(xué)過程,，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶,，一般使用Taq聚合酶,，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,，用于擴(kuò)增DNA鏈,；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,，硫代硫酸氫鹽SDS,、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,，從而提高反應(yīng)效率,；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,，常常需要進(jìn)行酶切操作,。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具,。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物,；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制,；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：
一,、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷,。在第一個(gè)循環(huán)之前,，通常加熱長一些時(shí)間以確保模板和引物分離,，僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段,。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后,，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上,。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合,。該步驟時(shí)間1-2分鐘,。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈,。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶,。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min,、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒,、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1,、變性溫度和時(shí)間：
保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵,。加熱90~95°C, 30~60s,，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈,。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害,。
2,、復(fù)性溫度和時(shí)間:
PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,，產(chǎn)物特異性越高,。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低,。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定,。
3、延伸溫度和時(shí)間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間,。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C,。延伸反應(yīng)時(shí)間,，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠,；大于1kb需加長延伸時(shí)間,。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間,。這里需要注意，延伸時(shí)間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間,。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后,，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度,。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù),。循環(huán)次數(shù)越多,，非特異擴(kuò)增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
腦膜炎奈瑟菌A群染料法熒光定量PCR試劑盒 | B細(xì)胞受體ELISA試劑盒 BCR免費(fèi)代測試劑 | 基因探針法熒光定量PCR試劑盒 |
同性戀螺桿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格 | 泛關(guān)聯(lián)蛋白2ELISA試劑盒 UBAP2免費(fèi)代測試劑 | 鴿副粘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng) |
疏螺旋體通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | TBP結(jié)合轉(zhuǎn)錄向下調(diào)節(jié)因子1ELISA試劑盒 | 庫皮科斯病毒PCR檢測試劑盒 |
小腸結(jié)腸耶爾森菌PCR檢測試劑盒 | 芳基硫酯JELISA試劑盒 | 口蹄疫病毒Asia1亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
牛鼻炎病毒A型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 分揀連接蛋白16ELISA試劑盒 | 人多瘤病毒6探針法熒光定量PCR試劑盒 |
腦膜炎奈瑟菌A群染料法熒光定量PCR試劑盒 | 封閉蛋白19ELISA試劑盒 | 衣氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
腦膜炎細(xì)菌多重PCR檢測試劑盒 | 鈣蛋白14ELISA試劑盒 | 人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒W家族染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
牛鼻炎病毒型PCR檢測試劑盒 | 鈣黏蛋白9ELISA試劑盒 | 姜黃染料法PCR鑒定試劑盒 |
牛病毒性腹瀉病毒2型PCR檢測試劑盒直銷 | 甘露糖ELISA試劑盒 | 人鼻病毒核檢測試劑盒 |
腦膜炎奈瑟菌血清群YPCR檢測試劑盒（熒光PCR法） | 干擾調(diào)節(jié)因子8ELISA試劑盒 | 庫蠓通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
梅毒螺旋體梅毒亞種探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人α半乳糖苷(αGAL)ELISA試劑盒 | 人類白細(xì)胞抗原（HLA-B）核檢測試劑盒 |
馬皰疹病毒4型（EHV-IV）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法） | 人凝血Ⅹ(FⅩ)檢測試劑盒elisa | 單純皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
口蹄疫病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 人G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)試劑盒ELISA | 解沒食子鏈球菌PCR檢測試劑盒 |
馬蛔蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)試劑盒ELISA | Elite樣本保存液雞傳染性喉氣管炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
布魯氏桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人泛連接(E3/UBPL) 試劑盒 ELISA | 人皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)