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參考價(jià)	面議

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50次
貨號	FS-01H3445	應(yīng)用領(lǐng)域	化工
主要用途	公司產(chǎn)品僅用于科研

牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒價(jià)格的相關(guān)產(chǎn)品:配對盒基因3抗體
配對盒基因8抗體
配對盒基因9抗體

詳細(xì)介紹

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl dNTP mix （2mM）

4 μl 引物1（10pM）

2 μl 引物2（10pM）

2 μl Taq酶（2U/μl）

1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl 加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增,；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測,；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存,。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒價(jià)格	50次	FS-01H3445

操作流程.jpg

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期）,，此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的,。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性定量方法，已得到的*,，廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。

定量PCR方法：

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強(qiáng)度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b,、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強(qiáng)度,，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測

使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。

8. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管,。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽性對照,。

78432-77-67-表-10-去乙酰基（95%）規(guī)格： 20mg

黃豆甙元規(guī)格： 100mg

93697-74-6吡嘧磺隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書規(guī)格： 0.1g

27409-30-9胡黃連Ⅰ 規(guī)格： 20mg

5041-82-7異鼠李-3-O-新橙皮規(guī)格： 20mg

498-02-2香草乙規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

垂盆草對照藥材規(guī)格： 1g

1818-71-9豆; 異鳥規(guī)格： HPLC≥98%,10mg/支

126-17-0澳洲茄胺;澳州茄胺規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

甲磺雙氫規(guī)格： 500mg

牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒價(jià)格雞支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：250g

V-J瓊脂培養(yǎng)基（USP）英文名稱：Vogeljohnson Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g