產品簡介：

產品名稱：總黃酮(TF)試劑盒說明書

規(guī)格：48樣 96樣

貨號：AS020

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產品分類：氧化應激系列

貯存溫度：2～8℃,。

本試劑盒保質期：6個月,。本產品僅用于科研實驗。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑二：液體 200μL×1 支,，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存,。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計,、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機,、移液器,、研缽、冰和蒸餾水

四,、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程,，避免實驗

樣本和試劑浪費,！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g）,，加入 1mL 提取液,，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,，取上清作為待測液,。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清,；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；

12000rpm 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

【注】：若增加樣本量,，可按照細菌/細胞數量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測,；若渾濁,，離心后取上清檢測。

Glucagon  抗體 規(guī)格: 0.1ml

PGF2 α  前列F2a抗體 規(guī)格: 0.2mlalpha 2 Macroglobulin  α2巨球(α-2M)抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-6R Beta/CD130/gp130  白細胞介6受體β抗體IL-6Rβ 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

phospho-MEF2D(Ser444)  磷化肌細胞特異性增強因子2D抗體 規(guī)格: 0.1ml

MAP1A  微管相關1A抗體 規(guī)格: 0.1ml

Vitamin D Binding protein  D結合抗體 規(guī)格: 0.2ml

E-cadherin/CD324  上皮鈣粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml

CDC42  細胞分化周期CDC42抗體 規(guī)格: 0.1ml

CGR19  細胞生調控19抗體（環(huán)指197） 規(guī)格: 0.2ml

PCDHA3  原鈣粘附α3抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-human IgG/HRP  辣根過氧化物標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

總黃酮(TF)試劑盒說明書3934-84-73-O-甲基沒食子 規(guī)格： 20mg

泛影 規(guī)格： 100mg

20736-09-8柴胡皂a 規(guī)格： 20mg

464-92-6積雪草 規(guī)格： HPLC≥98%,，20mg/vial

470-17-7異土木香內酯 規(guī)格： 20mg

腐胺 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

千里光對照藥材 規(guī)格： 1g

153719-23-4噻嗪;純品型;標準品;有證書 規(guī)格： 0.1g

4684-32-6鴨腳樹葉 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

枇杷葉 規(guī)格： 1g

操作步驟:

實驗開始前,，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時,，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,，如樣品濃度過高時,，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,，計算時再乘以相應的稀釋倍數,。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘,。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液,。

2.        棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制）,，酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）,。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl,，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,，棄去孔內液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）,。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應,，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。在加終止液后立即進行檢測,。