操作步驟:

實驗開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡,。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔,、標準孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制）,，酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl,，酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）,。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng),，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測,。

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)試劑盒科研

規(guī)格：48樣 96樣

貨號：AS312

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：呼吸代謝途徑系列

貯存溫度：2～8℃,。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實驗,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存,；

試劑三：液體 4mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶,，4℃保存,。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）,、低溫離心機,、移液器、研缽,、冰和蒸餾水

四,、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況,，熟悉實驗流程,，避免實驗

樣本和試劑浪費！

1,、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g）,，加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,，取上清作為待測液,。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取,。 ③ 液體樣本：直接檢測,；若渾濁，離心后取上清檢測,。

NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)試劑盒科研99-76-3泊金甲 規(guī)格： 20mg

3－乙?；?1－基乳香 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

76-22-2樟腦 規(guī)格： 20mg

19773-24-1貝母辛 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

野靛 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg

474-58-8胡蘿卜 規(guī)格： 20mg

30950-27-7紫蘇葶;Perillartine 規(guī)格： 20mg

107-43-7甜菜 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

315-22-0單響尾蛇 規(guī)格： HPLC≥99%，20mg/vial

524-30-1秦皮;fraxin 規(guī)格： 20mg