產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：支鏈氨基酸轉氨酶(BCAT)活性測定試劑盒科研

規(guī)格：24樣 48樣

貨號：AS150

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：氮代謝系列

貯存溫度：2～8℃,。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月,。本產(chǎn)品僅用于科研實驗,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑一：液體 5mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支,，4℃保存,；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑四：粉劑×2 瓶,，4℃保存。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計,、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）,、低溫離心機,、移液器、研缽,、冰和蒸餾水

四,、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,，了解本批樣品情況,，熟悉實驗流程，避免實驗

樣本和試劑浪費,！

1,、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液,，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器),。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液,。

【注】：若增加樣本量,，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；

12000rpm 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

【注】：若增加樣本量,，可按照細菌/細胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測,；若渾濁,，離心后取上清檢測。

IL-18（抗人,；抗兔,；抗小鼠；抗大鼠）  100微克

IL-19（抗人,；抗兔,；抗小鼠；抗大鼠）  100微克

ERK 1（抗人,；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

ERK 2（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

ERK 3（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

ERK 5（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

ERK 6（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

GSK-3 Alpha（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

GSK-3 Beta（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）  100微克

支鏈氨基酸轉氨酶(BCAT)活性測定試劑盒科研127-40-2葉黃;Xanthophyll 規(guī)格： 20mg

6001-78-8L-4-羥基異亮氨 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

花椒(青椒) 規(guī)格： 2g

藜蘆;Veratryl alcohol 規(guī)格： 20mg

29307-60-6京平龍膽雙糖 規(guī)格： 20mg

繡線菊 規(guī)格： 2g

552-58-9圣草 規(guī)格： 20mg

長梗秦艽;Waltonitone 規(guī)格： 20mg

466-24-0甲酰原;Benzoylaconi 規(guī)格： 20mg

15291-76-6銀杏內(nèi)酯 C 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

操作步驟:

實驗開始前,，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應對樣品進行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù),。

1.        加樣：分別設空白孔,、標準孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,，每次實驗請使用新的標準品溶液,。

2.        棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl,，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘,。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）,。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應,，此時藍色立轉黃色,。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液,。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測,。