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操作步驟:

實驗開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時,，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2.        棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng),，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。在加終止液后立即進(jìn)行檢測,。

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：亞鐵含量檢測試劑盒（亞鐵嗪比色法）品牌

規(guī)格：48樣 96樣

貨號：AS396

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)代謝指標(biāo)

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月,。本產(chǎn)品僅用于科研實驗,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：液體 5mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支,，4℃保存,；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑四：粉劑×2 瓶,，4℃保存。

 

所需的儀器和用品：

 

可見分光光度計,、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）,、低溫離心機(jī)、移液器,、研缽,、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況,，熟悉實驗流程,，避免實驗

樣本和試劑浪費！

1,、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g）,，加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器),。4oC×12000rpm 離心 10min,，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量,，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量,，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取,。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁,，離心后取上清檢測,。

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