樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g,，加入1mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于4℃,，10000g 離心 5min,，取全部上清于 4℃,、100000g離心30min,，棄上清,，取沉淀溶于 1mL 試劑一,。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時間3min）,；然后于4℃,，10000g 離心5min,，取全部上清于4℃、100000g 離心30min,，棄上清,，取沉淀溶于1mL試劑一。

3. 血清：直接測定,。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑一：液體 50mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑三：液體×5 瓶,，-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻,。(3天使用完)

優(yōu)點如下：

1,、快速簡便：操作時間短，48-50T,，可測40例樣本左右，96-100T,可測80例樣本左右,；

2,、取樣量微：常規(guī)操作取樣量50l， 酶標儀操作僅需5l即可檢測,，部分試劑盒取樣多少請,；

3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個月有效,；

4,、再現(xiàn)性好：20倍稀釋線性仍然良好；

5,、回收試驗： X =99%,；

6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,，重復(fù)性強；

7,、測試面廣：可測動物血清(漿),、組織、各種體液,、灌流液,、各種培養(yǎng)細胞以及細胞培養(yǎng)上清液等,，部分試劑盒適用于檢測植物。

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣,，不能加在管壁上

4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結(jié)合物后,，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。

3.為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。

4.加入底物后,，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實驗臺上,，以便 不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時,，即可終止酶反應(yīng),。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵,。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色,。

2.如用酶標儀測定結(jié)果,，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。

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